谢甲贝 张庆瑜 康春生 韩 静 王 涛 张 洁

多数恶性肿瘤在发现时已伴有不同程度的转移，研究其侵袭和转移机制意义重大。蛋白激酶B（PKB或Akt）通路即以丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族为中心的信号传导通路，是近年来肿瘤研究的热点。作为多种信号转导通路的焦点，其通过下游通路影响肿瘤细胞多重生物学效应，调节包括侵袭和转移在内的多种细胞内进程[1-2]。Akt亚型Akt1、Akt2在肿瘤发生过程中的作用不尽相同，在不同细胞系中对侵袭和转移的影响甚至相反[2]。本研究将外源性Akt1、Akt2基因导入人胃黏膜上皮细胞GES-1中，观察并分析两者对GES-1的影响，旨在从其侵袭力和迁移方面探讨Akt1、Akt2基因导致正常胃黏膜上皮细胞恶性转化的可能性。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株及质粒 GES-1购自北京百和营科技发展有限责任公司。p-LXSN质粒及含Akt1和Akt2基因全cDNA序列的p-LXSN-Akt1、p-LXSN-Akt2质粒由美国南佛罗里达大学Dr.Jin Q.Cheng惠赠。

1.1.2 主要试剂与仪器 质粒抽提、纯化试剂盒和总蛋白提取试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司，脂质体Lipo⁃fectamineTM2000、DMEM培养液、小牛血清、抗生素G418购自北京索莱宝科技有限公司，兔抗人Akt1、Akt2、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、抗丝状肌动蛋白（F-actin）单抗购自美国San⁃ta Cruz公司，抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶（抗GAPDH）单克隆抗体、辣根过氧化酶（HRP）标记的羊抗兔IgG抗体、免疫荧光单克隆抗体FITC标记二抗均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，增强化学发光（ECL）试剂盒和化学发光检测系统购自美国Pierce公司（SuperSignal West Pico 34080）；Olympus光学显微镜为日本Nikon公司产品。

1.2 方法

1.2.1 基因转染和克隆筛选 人胃黏膜上皮细胞GES-1体外细胞株培养于含有10%的胎牛血清的DMEM完全培养液中，培养条件为湿润状态下37℃，5%CO2。……