中国农业大学动物科学技术学院 李笑樱 范 彧 马秋刚＊ 计 成动物营养国家重点实验室

北 京 市 畜 牧 兽 医 总 站 陈 余 贾亚雄

首都师范大学 王晓霞

微生态制剂因其能改善畜禽胃肠道微生态平衡，提高畜禽对饲料养分的利用，增强机体免疫功能，且自身无毒、无抗药性、无残留、成本低，在一定程度上代替抗生素的使用已得到广泛验证和认同（辛娜等，2010）。其中，饲用芽孢杆菌和粪肠球菌，是国家允许使用的微生物饲料添加剂品种，已经被广泛应用 （Cutting，2011；张民和刁其玉，2003）。本研究拟选用产蛋后期蛋鸡作为试验动物，以添加不同种类的微生态制剂作为试验因子，结合饲养试验，探明微生态制剂对产蛋后期鸡饲料营养物质消化率的影响，为芽孢杆菌和粪肠球菌微生态制剂在产蛋鸡生产养殖中的实际应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 粪肠球菌微生态制剂，由动物营养国家重点实验室研制，每克中粪肠球菌含量大于 1×1010个。

芽孢杆菌微生态制剂，由动物营养国家重点实验室研制，每克中地衣芽孢杆菌内生芽孢大于1×1010个，枯草芽孢杆菌大于 1×1010个。

复合微生态制剂，由动物营养国家重点实验室研制，每克中地衣芽孢杆菌内生芽孢大于1×1010个，枯草芽孢杆菌大于1×1010个，粪肠球菌含量大于 1×1010个。

1.2 试验动物与设计 将96只50周龄左右且个体差异不显著的健康海兰褐产蛋后期蛋鸡随机分为成4个处理，每个处理8个重复，每个重复3只。其中，对照组饲喂基础日粮（玉米-豆粕-棉籽粕型日粮），不添加任何抗菌药物或微生态制剂；其他3个试验组在基础日粮基础上分别添加0.01%粪肠球菌微生态制剂、0.02%芽孢杆菌微生态制剂、0.03%复合微生态制剂。试验预试期为30 d，预试期结束时，在鸡只充分适应日粮营养和表现最佳生产性能的基础上，进行代谢试验，用以测定各处理饲料能量、粗蛋白质、干物质、钙、磷及氨基酸的利用效率。试鸡自由采食和饮水。

1.3 试验日粮组成及营养水平 对照组为玉米-豆粕-棉籽粕型基础日粮，其日粮组成及营养水平见表1。

1.4 样品采集 采用4 mol/L盐酸不溶灰分指示剂法，以重复为单位，连续3 d收集试鸡的粪尿排泄物，去除毛、皮屑和杂物，每天的排泄物滴加4 mol/L盐酸混匀，收好后立即置于-20℃下保存。将粪样倒入平皿中在65℃烘箱干燥至恒重，置室内回潮24 h，称重、记录，作为风干粪重；粉碎、过40目筛；再将排泄物混合均匀，装瓶封存并立即取样，在100～105℃下测定其绝干粪重。

1.5 测定指标

1.5.1 饲料和粪尿排泄物的总能 能量由中国农业大学动物营养国家重点实验室分析测试中心用全自动氧弹测热仪测定（国产）。

表1 试验日粮组成及营养水平

1.5.2 饲料和粪尿排泄物中粗蛋白质含量 粗蛋白质根据GB/T 6432-1994方法用凯氏定氮仪进行测定。

1.5.3 饲料和粪尿排泄物酸不溶灰分和水分含量酸不溶灰分含量测定：样品灰化后加入2 mol/L盐酸煮沸，无灰滤纸过滤，热水反复冲洗至无酸，试纸检验，将残渣和滤纸一并转移到已知重量的坩埚中，再灰化称重。水分采用GB/T 6435-2006方法测定。

1.5.4 钙磷测定 钙用GB/T 6436-2002中的乙胺四乙酸二钠络合滴定测定；磷用GB/T 6437-2002钼黄分光光度法测定。

1.5.5 氨基酸测定 样品经过酸水解（6 mol/L盐酸在110℃水解24 h）和氧化水解（蛋氨酸使用过氧甲酸进行氧化）处理，使用氨基酸自动分析仪（美国，HP）测定排泄物氨基酸 （色氨酸除外）含量。

以重复为单位计算微生态制剂芽孢杆菌和粪肠球菌对产蛋后期鸡饲料表观代谢能、干物质表观消化率、蛋白质、钙、磷及氨基酸的利用效率。各养分消化率计算公式如下：

养 分 表 观 消 化 率/%＝100-（粪中养分含量×饲料中指示剂含量）/饲料中养分含量×粪中指示剂含量×100。

1.6 数据分析 运用SAS 8.0软件中GLM过程进行方差分析，以P＜0.05为显著水平，方差分析显著者采用LSMEANS过程进行多重比较，试验结果用平均数±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 微生态制剂对蛋鸡饲料中能量、蛋白质、干物质、钙、磷表观消化率的影响

由表2可知，0.02%芽孢杆菌组和0.03%复合微生态组表观代谢能显著高于对照组 （P＜0.05），分别提高 11.8%、13.6%。由此可知，0.02%芽孢杆菌组和0.03%复合微生态组可以显著提高产蛋后期蛋鸡饲料表观代谢能。

表2 不同添加水平的微生态制剂对蛋鸡营养物质表观消化率的影响

0.02 %芽孢杆菌组和0.03%复合微生态组干物质表观消化率显著高于对照组（P＜0.05），分别提高14.7%、17.7%；由此可知，0.02%芽孢杆菌组和0.03%复合微生态组可以显著提高产蛋后期蛋鸡饲料干物质表观消化率。

0.02 %芽孢杆菌组和0.03%复合微生态组蛋白质表观消化率显著高于对照组（P＜0.05），分别提高35%、42.5%；试验组之间蛋白质表观消化率差异不显著（P＞0.05）。

0.01 %粪肠球菌组、0.02%芽孢杆菌组和0.03%复合微生态组蛋鸡钙、磷表观消化率均显著高于对照组（P＜0.05）。与对照组相比，各试验组钙表观消化率分别提高19%、29.2%和30%，试验组之间差异不显著（P>0.05）；试验组磷表观消化率分别提高20.7%、28.0%和29.2%，试验组之间差异不显著（P>0.05）。

2.2 微生态制剂对蛋鸡饲料中氨基酸表观消化率的影响 由表3可知，与对照组相比，0.03%复合微生态制剂组可以显著提高天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、苏氨酸、精氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、蛋氨酸、和半胱氨酸的表观消化率（P＜0.05）；0.02%芽孢杆菌组可以显著提高丝氨酸、谷氨酸、精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸和半胱氨酸的表观消化率（P＜0.05）；0.01%粪肠球菌组可以显著提高精氨酸消化率、亮氨酸和半胱氨酸的表观消化率（P ＜ 0.05）。

表3 不同添加水平的微生态制剂对氨基酸表观消化率的影响 %

3 讨论

在现代集约化饲养条件下，产蛋后期蛋鸡日粮的主要成分是玉米、豆粕等。植物细胞壁中的植酸和纤维素等抗营养物质与蛋白质和矿物元素等形成不溶复合物或络合物，从而影响营养物质的消化吸收。抗营养大分子物质较难溶解于产蛋后期蛋鸡分泌的消化液中，增加了消化道内容物的粘稠度，缩短了饲料通过消化道的时间，同时使日粮中的营养物质和机体分泌的内源酶难以扩散，并与消化酶作用降低酶活，导致营养物质的利用率降低。而微生态制剂可通过提高固有的消化过程的效率或通过促进原本不能消化的物质的消化来改善食物利用率，从而提高动物的生产性能（杜德伟，2006）。

本试验结果表明,添加0.01%粪肠球菌可以显著提高蛋鸡钙、磷表观消化率，与前人研究结果相同，同时可以显著提高精氨酸、亮氨酸、半胱氨酸表观消化率 （P＜0.05）。这可能是由于粪肠球菌属于乳酸菌，分泌大量乳酸，降低了肠道内容物的pH值，偏酸的环境有利于被结合或螯合的矿物元素以游离态释放，从而提高了钙、磷的利用率（杜晋平，2002）。同时通过产酸化环境，增加蛋白酶活性来参与蛋白质代谢过程，促进动物生产和生长（张日俊等，2005）。武英等（2004）在试验中发现，仔猪日粮中添加活菌制剂，一部分营养物质消化率成分绝对值较高，但与对照组相比差异不显著，这可能由于微生态制剂添加剂量不够，效果不明显。

本试验中，添加0.02%芽孢杆菌、0.03%复合微生态制剂可以分别显著提高蛋鸡日粮代谢能、干物质、粗蛋白质、钙磷表观消化率以及丝氨酸、谷氨酸、精氨酸等氨基酸表观消化率 （P＜0.05）。这可能是芽孢杆菌代谢产生具有较强活性的蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、葡聚糖酶、戊聚糖酶和纤维素酶等各种消化酶和促生长因子，可降解植物饲料中非淀粉多糖（Sogaard，1990），对植物性碳水化合物有较强的降解能力（Gomez-Gil等，1998），同时也可促进降解动物体内的甘油三酯、蛋白质、氨基酸等，增强对饲料养分的消化和吸收。同时，芽孢杆菌在其生长繁殖过程中能产生挥发性脂肪酸（VFA），降低动物肠道的pH值，抑制肠内病原菌的生长，促进矿物质吸收。这与他人的报道结果相一致，徐海燕等（2006）研究发现，芽孢杆菌发酵液中含有一定量的乙酸、丙酸、丁酸等有机酸，这些物质可以降低肠道pH，起到促进矿物质吸收的作用。李俊波等（2009）的试验也证明，日粮中添加枯草芽孢杆菌制剂能显著提高日粮粗蛋白质和有机物消化率。也有研究表明，微生态制剂可以通过其产生糖化酶、蛋白酶、脂肪酶等的作用来促进机体对营养成分的消化吸收。同时，微生态制剂可以影响小肠上皮细胞微绒毛中吸收酶的水平，调节营养吸收（Sogaard，1990）。 另外0.03%微生态制剂组中的主要菌种成分芽孢杆菌进入肠道并萌发成有代谢活性的细胞，消耗肠道中的氧气而有利于厌氧环境的形成，从而促进粪肠球菌以及肠道内乳酸菌的生长繁殖，降低肠道pH值，形成有利于提高消化酶活性和分泌量的肠道内环境，同时芽孢杆菌也分泌各种酶类和生物活性物质，共同加强机体对饲料中各种营养成分的消化吸收，提高饲料的利用率。

4 结论

本试验条件下，0.01%粪肠球菌、0.02%芽孢杆菌和0.03%复合微生态制剂可以显著提高产蛋后期蛋鸡日粮中钙、磷表观消化率和部分氨基酸表观消化率；0.02%芽孢杆菌和0.03%复合微生态制剂可以显著提高日粮代谢能和干物质、粗蛋白质、钙、磷表观消化率。

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