徐 倩 周晓慧 曹 凯 牛成伟 王 冰

(承德医学院,河北 承德 067000)

同型半胱氨酸(Hcy)是一种含硫氨基酸,为蛋氨酸循环的重要中间产物〔1〕。当Hcy代谢紊乱时,可诱导高同型半胱氨酸血症。近年来,大量研究表明,高同型半胱氨酸血症是导致动脉粥样硬化(AS)的独立的危险因素〔2〕。但是,Hcy致AS的机制目前仍不完全明确,多数研究认为,Hcy导致的氧化应激是As发生的重要环节,其中活性氧对内皮一氧化氮(NO)系统的损伤尤为重要。本研究通过观察Hcy对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)eNOS表达和NO含量的影响,探讨Hcy致AS的病理机制。

1 材料与方法

1.1 材料 胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、Hcy、四甲基噻唑氮蓝(MTT)均购自Sigma公司,DMEM培养基购自Gibco公司,碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)购自 E.coli公司。TaKaRa RNA PCR Kit(AMV)Ver.3.0购自宝生物工程(大连)有限公司。Trizol购自invitrogen公司,DEPC购自德国amresco公司。琼脂糖购自美国Uniche Co公司。NO测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。其他试剂均为国产分析纯。

1.2 主要仪器 HERAcell 150型CO2孵育箱购自Heraeus公司,LEICA DMIL 090-135.001型倒置显微镜购自Wetzlar GmbH公司,净化工作台购自上海新苗医疗器械制造有限公司,PTC-100购自MJ RESEARCH,INC,紫外可见分光光度计(DU800)购自BECKMAN COULTER公司,紫外透射反射分析仪(ZF型)购自上海嘉鹏科技有限公司。

1.3 HUVECs培养及分组 取健康剖宫产妇新生胎儿脐带,PBS液冲洗干净,用1∶1的0.1%Ⅰ型胶原酶和0.25%的胰酶-0.02%EDTA(V/V=1∶1)消化13 min,收集消化液,1 000 r/min离心10 min后,弃上清,用含20%胎牛血清、10μg/L bFGF的DMEM培养基重悬,接种于25 cm2培养瓶中,置于37℃、5%CO2培养箱中培养。24 h后换液,待细胞达到80%融合时,用0.125%胰酶-0.01%EDTA(V/V=1∶1)消化传代。实验用第2代细胞,实验分组如下:正常对照组、Hcy剂量组。正常对照组细胞加含……