杨德玉 李希圣

(1.安徽中医学院第一附属医院急诊科 合肥 230031;2.福建医科大学第二附属医院内分泌科 泉州 100088)

Resistin是由Steppan等[1]于2001年首先报道并命名的一种脂肪来源的新激素,被认为可能作为肥胖与IR联系的纽带,参与IR的发生。Ma等[2]发现抵抗素基因299G/A多态与肥胖间可能存在相互作用。本研究拟通过检测福建泉州地区人群血清抵抗素水平、抵抗素基因299G/A位点多态性、胰岛素抵抗指数等指标以探讨抵抗素、抵抗素基因299G/A位点多态性在腹型肥胖胰岛素抵抗中的作用。

1 对象与方法

1.1 对象

腹型肥胖组:依据国际糖尿病联盟公布的代谢综合症工作定义(2005年)及中心性肥胖诊断标准入选的我院体检对象125例,其中男65例,女60例,年龄22～70岁,平均(45.6±9.8)岁。排除:(1)恶性肿瘤;(2)糖尿病及中间型高血糖;(3)感染性疾病;(4)近期创伤手术(6个月内);(5)心衰;(6)近期口服调脂药物。对照组:体检健康者85例,男45例,女40例,年龄15～61岁,平均(35.8±10.7)岁。

1.2 方法

1.2.1 检测指标 所有受试对象测定空腹血糖(FPG)、胆固醇(CHO)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、载脂蛋白a(ApoA)、载脂蛋白b(ApoB)、抵抗素(Resistin)、胰岛素(FINS)。

1.2.2 基因多态性检测 (1)聚合酶链反应:由基因组纯化试剂盒提取DNA,以软件DNAStar设计PCR引物:上游5′GGAAGAAGCCATCAATGAGAGG3′,下 游 5′CCTGTTGGTTTGGAGCTA G GTC3′,扩增片段352bp。在25uL反应体系中扩增基因组DNA。PCR循环参数为:初期94℃变性5min,继之35个循环,每个循环中94℃变性1min,62℃退火1min,72℃延伸2min,最后于72℃延伸15min。(2)酶切:取限制性内切酶AluI 0.5uL(5U)、10×NEB缓冲液2uL、PCR产物14uL、灭菌双蒸水3.5uL混匀,37℃水浴酶切16h。最后将PCR剩余11uL和20uL酶切液上样于3.0%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,凝胶成像分析仪下观察结果,分析基因型。G/G基因型产生71bp、243bp、23bp和15bp片段;G/A基因型产生71bp、243bp、158bp、85bp、23bp和15bp片段;A/A基因型产生71bp、158bp、85bp、23bp和15bp。……