李露 张天云 崔丽琼

(解放军第一医院呼吸科 兰州 730000)

IgA肾病在我国约占原发肾小球疾病的1/3,也是导致终末期肾病的常见病因之一,当前认为遗传因素与该病的易感性有关,并影响疾病的发生和发展。国内学者在IgA肾病患者及其家庭成员中采用传递不平衡检验(transmission disequili-brium test,TDT)和单倍体相对风险(haplotype relative risk,HRR)分析法对megsin基因3＇端非翻译区的C-2180T区的基因多态性进行分析研究后发现,C-2180T区的等位基因明显是由杂合亲代传向子代患者,且这个等位基因共同传递的比率明显增加,说明megsin基因的变异性与IgA肾病发生的易感性相关［1］。本文用PCR-RFLP法及基因测序法鉴定基因型,采用病例对照研究的方法,探讨了兰州地区汉族人群IgA肾病中C-25663G基因多态性分子遗传学意义。

图1 1,2为CG杂合子;3为CC纯合子;4为GG纯合子;M为DAN标准分子量(DNA Marker)

1 对象与方法

1.1 对象

1.1.1 IgA肾病组 解放军第一医院心肾科经皮肾穿刺活检证实为IgA肾病的兰州地区汉族的患者44例(男23例,女21例),年龄(10～49)岁,平均(32±5)岁。IgA肾病病理诊断标准采用2001年全国肾活检病理诊断标准［2］。均排除继发性肾脏疾病和其他合并症及并发症。

1.1.2 正常对照组 解放军第一医院100名(男72名,女28名)体检正常的兰州地区汉族健康人群,年龄(19～46)岁,平均(23±4)岁。

1.2 基因组DNA的提取

采用QIAamp (r)DNA试剂盒从EDTA抗凝200μL外周静脉血中提取基因组DNA。

1.3 Megsin基因C-25663G基因鉴定

应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(poly-merase chain react ion-restrict ion fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法做基因型鉴定。上下游引物分别为5＇-GCT CAG ATA CAA TGG TGG CATA-3＇和5＇-GCT GAC ATT TGA GAG TTC CA-3＇(美国生命技术公司合成)。PCR反应条件:95°C预变性15s,94°C变性30s,51退火15s,72°C延伸30s,共35个循环,最后72°C延伸5min。PCR反应体积为30μL。产物用限制性内切酶Hinf I(Promega公司)37°C消化6h以上或过夜,2%琼脂糖凝胶电泳确定基因型。

表1 IgA肾病患者C-2093T多态性分部与正常人群比较[例（%)]

1.4 统计学处理

统计学分析经遗传平衡检测证明,IgA肾病患者与对照组均符合Hardy-Weinberg平衡,具有群体代表性。应用SPSS 13.0统计软件进行分析。所有统计分析中,P<0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Megsin基因C-25663G基因鉴定

酶切后,等位基因CC型产生200、117bp2条片段;CG型产生317、200、117bp3条片段;GG型产生317bp1条片段,见图1。

2.2 Megsin基因C-25663G基因多态性检测结果

基因分布CC型者28例,CG型者12例,GG型者4例,等位基因C型68例,G型20例,与正常对照组基因分布相比,均无统计学意义(P<0.01),见表1。

3 讨论

我们以往的研究发现,Megsin基因3＇端非翻译区C-2093T和C-2180T多态性与中国汉族人群IgA肾病的发生显著相关［3］。国内学者应用PCR-RFLP方法鉴定IgA肾病患者基因型,用以家庭为基础的传递不平衡检验(TDT)、单倍型相对危险度(HRR)分析结合病例对照研究方法,首先分析Megsin基因C-25663G多态性与我国汉族人群IgA肾病发生的关系,结果显示,Megsin基因C-25663G多态性与中国汉族人群IgA肾病的发生及病情进展无关［4］。但由于基因多态性研究多受人群、地域、标本量、研究方法等多方面影响,单一的研究结果无明显的参考价值。

本研究用PCR-RFLP法鉴定基因型,采用病例对照研究的方法,探讨兰州地区汉族人群IgA肾病中C-25663G基因多态性分子遗传学意义。研究结果显示,IgA肾病基因分布CC型者28例(63.63%),CG型者12例(27.27%),GG型者4例(9.09%),等位基因C型68例(77.27%),T型20例(22.73%),与正常对照组基因分布相比,均无统计学意义(P<0.01)。研究结果提示Megsin基因C-2093T多态性与IgA肾病的发病可能无关,此结果和夏运风教授研究结果相似,但这个研究结果对IgA肾病的发病机制、临床用药,以及未来基因监测和基因治疗将具有重要的指导意义。

[1]Li YJ,Du Y,Li CX,et al.Family- based association study showing that immunoglobul in A nephropathy is associated with the polymorphisms 2093C and 2180T in the 3＇untranslated region of the Megsin gene[J].J Am Soc Nephrol, 2004,15:1739～1743.

[2]全国肾活检病理研讨会.肾活检病理诊断标准指导意见[J].中华肾脏病志,2001,17:270.

[3]M iyata T,NangakuM,Su zuk iD,et al.A mesangium predominant gene,megsin,is a new serp in up regulated in IgA nephropathy[J].JC lin Invest,1998,102(4):828～836.

[4]Miyata T,Nangaku M,Suzuk iD,et al.Amesangium predominantgene,megsin,is a new serp in up regulated in IgA nephropathy[J].J Clin Invest,1998,102(1):828～836.