李露 张天云 崔丽琼

(解放军第一医院呼吸科 兰州 730000)

IgA肾病在我国约占原发肾小球疾病的1/3,也是导致终末期肾病的常见病因之一,当前认为遗传因素与该病的易感性有关,并影响疾病的发生和发展。国内学者在IgA肾病患者及其家庭成员中采用传递不平衡检验(transmission disequili-brium test,TDT)和单倍体相对风险(haplotype relative risk,HRR)分析法对megsin基因3＇端非翻译区的C-2180T区的基因多态性进行分析研究后发现,C-2180T区的等位基因明显是由杂合亲代传向子代患者,且这个等位基因共同传递的比率明显增加,说明megsin基因的变异性与IgA肾病发生的易感性相关［1］。本文用PCR-RFLP法及基因测序法鉴定基因型,采用病例对照研究的方法,探讨了兰州地区汉族人群IgA肾病中C-25663G基因多态性分子遗传学意义。

图1 1,2为CG杂合子;3为CC纯合子;4为GG纯合子;M为DAN标准分子量(DNA Marker)

1 对象与方法

1.1 对象

1.1.1 IgA肾病组 解放军第一医院心肾科经皮肾穿刺活检证实为IgA肾病的兰州地区汉族的患者44例(男23例,女21例),年龄(10～49)岁,平均(32±5)岁。IgA肾病病理诊断标准采用2001年全国肾活检病理诊断标准［2］。均排除继发性肾脏疾病和其他合并症及并发症。

1.1.2 正常对照组 解放军第一医院100名(男72名,女28名)体检正常的兰州地区汉族健康人群,年龄(19～46)岁,平均(23±4)岁。

1.2 基因组DNA的提取

采用QIAamp (r)DNA试剂盒从EDTA抗凝200μL外周静脉血中提取基因组DNA。

1.3 Megsin基因C-25663G基因鉴定

应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(poly-merase chain react ion-restrict ion fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法做基因型鉴定。上下游引物分别为5＇-GCT CAG ATA CAA TGG TGG CATA-3＇和5＇-GCT GAC ATT TGA GAG TTC CA-3＇(美国生命技术公司合成)。PCR反应条件:95°C预变性15s,94°C变性30s,51退火15s,72°C延伸30s,共35个循环,最后72°C延伸5min。PCR反应体积为30μL。……