丁志 邓辰亮 郑江红 万伟东 茅广宇 杨松林

随着再生医学的兴起，细胞治疗得到不断发展，干细胞因具有多向分化潜能和自我复制能力而备受关注。其中，间充质干细胞因来源广泛，分离培养容易，增殖和多向分化能力强，已成为干细胞治疗领域的研究热点，被广泛报道应用于各种病损的组织器官。近年来的诸多研究发现，骨髓间充质干细胞（BMSC）除能分化为多种参与血管形成的细胞外，还能分泌 VEGF、IGF、EGF、KGF、TGF、SDF1 等多种促进血管生成的细胞因子[1-2]，促进血管再生、改善局部血供，已用于治疗心肌缺血、缺血皮瓣的成活等[3-5]。而预构皮瓣成功的关键也是血管再生，因此用间充质干细胞来促进预构皮瓣的成活应是可行的。因此，本研究在将兔股动静脉血管束植入其腹部皮下的同时，向血管束周围注射BMSC悬液，通过观察其分化作用和旁分泌作用，以及对预构皮瓣成活的影响，探讨BMSC促进预构皮瓣存活的可能性。

1 材料与方法

1.1 材料

DMEM-F12培养基、胎牛血清（Gibco公司，美国）；兔抗人VEGF单克隆抗体、FITC标记的BrdU特异性单克隆抗体（Roche公司，瑞典）；耐光性菁染料cyb3标记的vWF多克隆抗体 （Santa Cruz公司，加拿大）；小鼠抗兔-CD45-FITC、小鼠抗兔-CD90-FITC（Caltage 公司，美国）；小鼠抗兔-CD34-FITC、小鼠抗兔-CD45-FITC（Santa Cruz公司，加拿大）；BrdU（溴脱氧尿嘧啶）、CFDA-SE（羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯）（友谊中联生物科技公司，中国）；山羊抗兔罗丹明 （武汉博士德公司，中国）；PVDF膜 （Millipore公司，美国）；ECL发光试剂盒（Thermo 公司，美国）；流式细胞仪（Becton Dickinson公司，美国）；电泳仪 EPS-300（天能，中国）；16 只健康雄性新西兰大白兔（上海生旺实验养殖场，中国）。……