齐登斌,郑辑英,李光来,薛国芳

癫痫持续状态(status epilepticus,SE)是临床医学急症之一,可导致急性或持续性的认知及行为改变,尤其易致海马、大脑皮质等边缘神经元的损伤。细胞凋亡是一种受基因调控的自主性、程序性死亡过程,是SE后神经元死亡的重要形式。大量研究表明,X-染色体连锁凋亡蛋白抑制剂(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)参与了多种脑损伤的凋亡调控机制,使Caspase-3活性下降,神经元凋亡减少,脑损伤减轻[1]。然而对于作用于Caspase-3发挥抗凋亡效应的XIAP在SE中的病理生理机制研究甚少。丙酮酸乙酯是近年来研究较多的新型脑保护剂[2],但丙酮酸乙酯对SE后的神经元损伤是否也具有保护作用尚未见报道。本实验旨在观察SE后大鼠神经元凋亡相关基因XIAP、Caspase-3的表达情况,并探讨丙酮酸乙酯对SE导致的大脑神经元损伤的影响及其可能机制,为丙酮酸乙酯应用于临床防治SE提供动物实验基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料 健康成年雄性Wistar大鼠54只(山西医科大学实验动物中心提供),体重190 g～230 g;氯化锂、匹鲁卡品、丙酮酸乙酯均购自美国Sigma公司;XIAP兔抗鼠多克隆抗体购自北京博奥森生物科技有限公司;Caspase-3兔抗鼠多克隆抗体、T UNEL试剂盒、即用型SABC试剂盒、DAB试剂均购自武汉博士德生物工程公司。

1.2 方法

1.2.1 动物分组 雄性Wistar大鼠54只,随机分为对照组(N组)6只、模型组(M 组)和丙酮酸乙酯组(EP组)各24只,后两组按时间点分为4个亚组(6 h,12 h,24 h,48 h)。

1.2.2 动物模型建立 各组均采用灌胃法处理,EP组造模前15 min腹腔注射丙酮酸乙酯50 mg/kg,N组和M组给予等容积生理盐水。15 min后M组、EP组腹腔注射氯化锂按体重127 mg/kg,20 h后经腹腔注射新鲜配制的匹罗卡品30 mg/kg。……