郭丽君,袁慧欣,阚卫军,乔振华,薛福平

脑组织局部神经细胞过度凋亡是造成脑缺血再灌注损伤的主要原因之一。近来研究发现,重组人红细胞生成素(rh-EPO)对脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用[1],可能与抑制线粒体凋亡途径介导的细胞凋亡有关,而rh-EPO对脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡抑制蛋白(XIAP)、Smac蛋白表达的影响鲜见报道。本研究观察了大鼠脑缺血再灌注损伤后XIAP及Smac蛋白表达的变化情况,探讨 rhEPO对 XIAP及Smac蛋白表达的影响及神经保护作用的可能分子机制,为临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料 健康雄性Wistar大鼠70只,体重220 g～250 g,山西医科大学生理实验室提供。XIAP兔抗大鼠多克隆抗体(博奥森公司);Smac兔抗大鼠多克隆抗体、TUNEL凋亡检测试剂盒、DAB显色剂(均购自北京中杉金桥);rh-EPO(成都地奥);0.23 mm市售渔线;BI-2000医学图像分析系统、PM-10AD光学显微镜(日本OLYMPUS公司)。

1.2 方法

1.2.1 动物模型制备 参照Zea longa线栓法加以改良制备大鼠右侧大脑中动脉阻断(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型[2]。阻闭1 h后抽出渔线,恢复再灌注。假手术组置入10 mm即可,余步骤同模型组。在缺血期间及再灌注后1h保持体温在(37±0.5)℃。

各组均在术后1 h～2 h大鼠清醒时参照Bederson评分标准[3]进行神经功能缺失体征评分。造模成功的判断标准:以清醒后左侧前肢不能完全伸展,前进时向左侧转圈、倾倒,并出现霍纳征为模型成功的判断标准,不成功者剔除,再随机补充。

1.2.2 分组及标本制备 实验分为3组,假手术组 20只,缺血组及 rh-EPO治疗组,每组25只。于再灌注后即刻,假手术组及缺血组腹腔内注入0.3mL生理盐水;治疗组腹腔内注入rh-EPO(2 500 U/kg),共 5 d。……