韩 刚,李金龙,贾明库

(吉林大学第二医院普通外科,吉林长春130041)

大肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,目前治疗原则以手术为主。而对于手术切除困难甚至失去手术机会的患者目前仍是困扰临床医生的难题。近年来肿瘤的生物治疗研究较多,并取得了一定的疗效与进步。本文通过观察以CpG ODN为免疫佐剂,联合应用肿瘤冻融抗原和IL-2激活PBMC,对其增殖活性、肿瘤杀伤活性及T亚群活性的影响,探讨CpG ODN作为佐剂在抗肿瘤免疫中的作用,寻找合理的肿瘤免疫治疗方法。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1病例选择 分别选取本院健康志愿者和结肠癌患者各5人进行采血,量为20 ml,采血后2 h内分离。

1.1.2肿瘤细胞株、CpG2006和IL-2 人结肠癌细胞株SW1116购自吉林省肿瘤研究所;CpG 2006由上海生工生物技术服务公司合成;IL-2购自长生基因药业股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1人PBMC的分离 每份血样中加入等量生理盐水混匀稀释,加3 ml淋巴细胞分离液,离心。分离出离心分层后单个核细胞层,另加入RPMI1640后离心,洗涤2次。计算活细胞百分数＞95%。

1.2.2肿瘤抗原的制备 SW111细胞培养于含10%FCS的IMDM培养基中,0.25%胰酶消化传代。细胞呈指数期生长时,调细胞浓度1×107/ml,共计8.8 ml。放入液氮中10 min,室温融化,反复5次。4℃离心,15 000 rpm,1 h。收上清。同时将细胞沉淀溶于8.8 ml生理盐水中,超声细胞破碎仪破碎30 min,4℃离心,15 000 rpm,1 h。收上清。两次离心收获的上清混合,-80℃保存备用。用紫外分光光度仪测蛋白浓度。

1.2.3CpG-ODN刺激PBMC对肿瘤细胞的杀伤活性测定 调PBMC细胞浓度为6×106/ml,接种于24孔板,每孔500 μ l,每组2复孔。其中 PHA 10倍稀释 ,每孔加 100 μ l。抗原 3 倍稀释 ,每孔加 100 μ l。……