张德庆,陈东育,宋兆峰

(泰安市中心医院 1.检验科;2.风湿免疫科;3.心血管内科,山东 泰安271000)

脆性组氨酸三联体(fragi1ehistidinetriad,FHIT)基因是一种抑癌基因,与多种恶性肿瘤的发生密切相关。人们对其深入探讨,发现该蛋白在多种肿瘤发生过程中发生广泛的缺失和失活[1、2],在消化道肿瘤亦发现FHIT基因表达异常[3]。本文采用免疫组化和RT-PCR技术检测食管癌及相应癌旁组织的FHIT蛋白和mRNA表达情况,从而探讨FHIT与食管癌发生、发展的关系,以及在食管癌的诊断、治疗以及预后判断等方面的意义。

1 材料和方法

1.1 材料

收集我院肿瘤外科自2006年4月至2007年1月收治的50例食管癌患者的食管癌组织及相应癌旁组织,同期从我院内镜室收集30例正常食管组织。所有组织标本均经病理检查证实,临床资料完整。50例食管癌均为食管鳞癌,其中男性31例,女性19例,年龄35-75岁,平均年龄53岁。依据1987年颁发的国际统一的食管癌TNM分期标准,TNM分期:Ⅰ期8例,Ⅱ期10例,Ⅲ期19例,Ⅳ期13例。所有患者术前均未进行化疗及放疗。

1.2 方法

1.2.1RT-PCR 将手术切取冻存的食管癌组织及相应癌旁组织制备成悬液,总RNA提取按Trizol试剂盒一步法提取。按试剂盒(试剂盒均为宝生物工程有限公司合成提供)要求的条件合成cDNA,所得逆转录产物用于PCR扩增。PCR反应条件:94℃2 min预变性,94℃变性40 sec,55℃退火40 sec,72℃延伸40 sec,共36个循环,72℃延伸7 min。基因引物序列及扩增片段见表1。

表1 FHIT基因引物序列及扩增片段

1.2.2免疫组化 采用SP免疫组化检测法,抗FHIT多克隆抗体(一抗)和免疫组化染色超敏试剂盒(北京中山试剂公司)。以胞质内出现棕色颗粒为阳性,并根据阳性细胞数及反应强度制定如下判断标准。……