陈 燕,郭宝锋,邵 晨,杨宝学,4,赵雪俭*

(1.吉林大学第一医院肾病科,吉林长春130021;2.吉林大学白求恩医学院病理生理学教研室;3.吉林大学中日联谊医院急诊科;4.北京大学药理学教研室)

多囊肾脏组织特异性敲除小鼠(pkd1flox/-;Ksp-Cre Mouse,以下简称为PKD小鼠)只在肾脏发生囊泡,而其他组织器官未见异常。为探讨PKD小鼠肾功能在出生后随天数增加的变化情况,本研究室培育PKD小鼠,分别检测各时间点PKD小鼠及野生小鼠肾脏脏器系数,并应用尿素检测试剂盒对各时间点小鼠肾脏组织、血清中尿素含量进行检测。

1 材料与方法

1.1动物PKD小鼠由美国加州大学旧金山医学院医学系引进,在本中心稳定繁殖、传代,经基因组DNA鉴定确定小鼠的基因表型。

1.2肾脏组织的形态学检查取新鲜肾脏组织用10%福尔马林固定,石蜡包埋,切取4 μ m厚切片,常规脱蜡、脱水,HE染色,光镜下观察肾脏的病理改变并进行拍照。

1.3肾脏组织的脏器系数将各实验组小鼠称重,然后解剖小鼠取肾脏组织进行称重,计算公式:肾脏脏器系数=肾脏重量/小鼠体重。

1.4肾脏组织、血清中尿素含量的检测取肾脏组织进行组织匀浆后(1 mg/15 μ l),3 000 rpm离心,取上清,用尿素检测试剂盒(Bioassay公司)对肾脏组织中尿素含量进行检测,检测方法如下:取2.5 μ l肾脏组织上清样本和标准品、2.5 μ l血清样本和标准品分别加到清洁的96孔板中,然后分别加入100 μ l试剂A和试剂B,充分混匀,室温孵育20 min后,用酶标仪检测(520 nm)。计算公式:尿素含量(mg/dL)=(样品吸光度-空白吸光度)/(标准吸光度-空白吸光度)×稀释倍数×50。……