邢 燕,孙致连,董崇周,叶山东

(安徽医科大学附属省立医院·安徽省立医院内分泌科,安徽合肥230001)

肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAS)活化参与了多器官损伤(包括糖尿病肾小球硬化),其对肾脏的损害可通过肾小球血流动力学和非血流动力学两方面发挥作用,其中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)起了重要介导作用[1]。近来研究证实慢性低度炎症反应参与肾小球硬化,尤其是糖尿病肾小球硬化的发生和发展[2]。单核巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)作为一种重要的炎症趋化刺激因子,主要趋化单核细胞和T淋巴细胞,诱导单核细胞、内皮细胞表达黏附分子,使各种炎性细胞尤其是单核细胞向病变部位聚集,参与肾小球硬化的发生。

本试验应用SD大鼠肾小球系膜细胞的细胞株,观察AngⅡ对肾小球系膜细胞MCP-1 mRNA表达和蛋白合成的影响,探讨AngⅡ参与肾小球硬化的炎性机制,为临床应用血管紧张素转化酶抑制剂或AngⅡ受体阻滞剂防治肾小球硬化提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 主要实验试剂

小牛血清(杭州四季青公司);Trizol(美国Invitrogen公司);逆转录试剂盒(美国Promega公司);PCR试剂(大连宝生物公司);DEPC(美国Sigma公司);胰蛋白酶(美国Sigma公司);L-谷氨酰胺(美国Life Technologies公司);HEPES(华美生物工程公司);MCP-1 ELISA试剂盒(美国R&D公司);PCR所用引物(上海生工生物技术有限公司);血管紧张素Ⅱ(美国Sigma公司)。

1.2 实验方法

1.2.1实验细胞 SD大鼠肾小球系膜细胞株(HBZY-1)购自中国典型培养物保藏中心。

1.2.2肾小球系膜细胞培养和标本收集 液氮罐取出冻存的细胞株快融复苏后离心弃上清后接种于培养瓶中。……