宋菁华,王 玫,李 斌

(1.首都医科大学附属北京安贞医院 妇产科,北京100029;2.中国人民解放军302医院 妇产科,北京100039)

肿瘤抑素是胶原蛋白Ⅳα 3链的非胶原区,由Saus等在80年代作为肺-肾出血综合征的自身抗原而被发现[1]。2000年,Kamphaus等发现其有2个不同的抗肿瘤活性区[2],其中之一是靠近C端的185-203位氨基酸组成的19肽,因其具有直接抑制肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞凋亡的作用受到人们的普遍关注[3]。有研究表明,19肽作为肿瘤抑素整体的一部分时,并不显示其抗肿瘤细胞增殖的功能[4],且肿瘤抑素的分子质量较大,本身含有肺-肾出血综合征的自身抗原,限制了其应用。本实验通过基因工程技术获得了分子质量小、可溶性高、使用安全的肿瘤抑素19肽,建立人卵巢癌细胞SKOV3裸鼠移植瘤模型及肿瘤抑制实验的研究,探索肿瘤抑素19肽抗肿瘤活性及其作用机制。

1 材料和方法

1.1 材料

人卵巢癌SKOV3细胞购自中国科学院上海细胞生物化学研究所;肿瘤抑素19肽由本室克隆、表达和纯化后制备;BALB/c(nu/nu)裸鼠购自吉林大学第一医院;RPMI1640培养基购自GIBCO BRL;胎牛血清购自清源生物公司;原位细胞凋亡检测试剂盒、SABC免疫组化染色试剂盒、AEC显色试剂盒购自博士德生物工程有限公司;caspase 3一抗购自Santa Cruz Biotechnology公司。

1.2 方法

1.2.1实验动物模型制备 收获对数生长期卵巢癌SKOV3细胞,含胎牛血清的RPMI-1640培养液重悬,调整为1×107个/ml,抽取细胞悬液500 μ l接种于裸鼠腋窝近肩胛下部皮下,形成一隆起皮丘。当细胞接种成功的原代移植瘤长至直径0.8-1.0 cm时,在无菌条件下颈椎脱臼法处死裸鼠,用无菌眼科剪镊剥取皮下肿瘤,剪成直径1-2 mm瘤组织块接种至裸鼠皮下。……