韩海玲,孙玉芹,2*,宋文刚,朱玉红,吕冬燕,朱艳彬,何海涛,姜 欣

(1.北华大学附属医院心脑科,吉林吉林市132011;2.吉林大学;3.吉林市水务集团职工医院)

血管内皮细胞为衬覆于血管内腔面的单层扁平细胞,依靠其正常的增殖和凋亡平衡,保证了血管的结构和功能正常[1]。近年研究表明,越来越多的心血管疾病的发生、发展与内皮细胞增生及凋亡有关[2-4]。经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后再狭窄作为目前冠心病介入研究领域的研究热点。在目前的研究中,对血管内皮细胞的研究少见。本课题以LPC作用于血管内皮细胞建立再狭窄的内皮细胞模型[4],并探讨红花黄色素对血管内皮细胞增殖的干预作用,以期为为临床应用奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1材料RPMI-1640培养基(GIBCO,美国),胎牛血清(杭州四季青公司),红花黄色素、LPC、胰蛋白酶、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(Sigma,美国),Annexin VFITCPPI凋亡检测试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司),酶联免疫检测仪(Biotek,美国),荧光显微镜(Olymypus,日本),流式细胞仪(BD,美国),低温离心机(Beckman,美国),NO测试盒(南京建成生物工程公司),高速低温离心机(Eppendorf,美国)。

细胞株及细胞培养:人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)株CRL-1730由吉林大学基础医学院馈赠。采用常规培养,将冻存的HUVECs株解冻复苏后,含15%胎牛血清RPMI1640培养液,于37℃、100%饱和湿度、5%CO2孵箱培养。常规传代,待细胞进入对数生长期后用于实验。

设计分组:取对数生长期细胞,按传代方法制成单细胞悬液,进行如下分组:(1)正常对照组当细胞长至60%-70%满时换培养液。(2)LPC组当细胞长至60%-70%满时换含有浓度为10 mg/L的LPC的PBS培养液。……