张淑芳,刘大程,孙吉凤,台桂香*

(1.长春医学高等专科学校生化教研室,吉林长春130031;2.吉林大学白求恩医学院免疫学教研室,吉林长春130021)

FTY720是冬虫夏草代谢产物ISP-l经化学修饰而得到的一种新的化合物[1]。它作为一种新型免疫抑制剂被研究的较多,而对FTY720抑制肿瘤细胞增殖、促进细胞凋亡的研究,国内罕见报道。因此,我们选择了以人乳腺癌(MCF-7)细胞为研究对象,初步探讨FTY720对体外培养肿瘤细胞增殖抑制及凋亡的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1细胞株 人乳腺癌(MCF-7)细胞本研究室保存。

1.1.2药品与试剂 RPMI1640培养基购于Gibco/BRL公司。四甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)、小牛血清及碘化丙啶(PI)、瑞士-姬姆萨染色液购于北京鼎国生物技术公司。FTY720购自美国SIGMA公司。

1.2 实验方法

1.2.1细胞培养 人乳腺癌(MCF-7)细胞株接种于含10%小牛血清、100 U/ml青霉素及100 U/ml链霉素的RPMI1640培养液中,置37℃、5%CO2孵箱中培养,24-48 h换液、传代1次。

1.2.2MTT法检测细胞增殖抑制率 收集对数生长期的MCF-7细胞并调细胞浓度至5×104个/ml接种于96孔培养板,每孔加 100 μ l细胞悬液,置于37℃、5%CO2培养箱内培养24 h后给药。实验设药物处理组、阴性对照组、空白对照:药物处理组每孔加入100 μ l FTY720溶液使其终浓度分别达到400、800、1 600、3 200、6 400 ng/ml,阴性对照组不加药物,空白对照不加细胞只加RMPI1640培养液,各浓度组均设3复孔,37℃、5%CO2培养箱培养48 h,每孔加入 5 mg/ml MTT 10 μ l,继续孵育 4 h 后,弃上清液,加入150 μ l DMSO,轻轻振荡 10分钟 ,待蓝紫色结晶物完全溶解,于570 nm波长处在酶标仪上测吸光度值(OD值),求平均值,计算药物对细胞生长增殖的抑制率。细胞生长抑制率=(1-药物处理组OD值/阴性对照组OD值)×100%。

1.2.3瑞士……