姜铁超,邹颖刚,于晓艳,杨 萍*

(1.吉林大学中日联谊医院,吉林长春130033;2.吉林大学第二医院;3.吉林大学药学院)

心肌纤维化(myocardial fibriosis,MF)是指在心肌细胞外基质中胶原含量显著升高。这种病理变化在多种心血管疾病中存在,是多种心脏疾病发展到一定阶段的共同病理改变,是心肌重构的主要表现之一[1-5]。成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors,FGF),又称为肝素结合因子,是一组蛋白质结构相关的多基因大家族。到目前为止,发现FGF超家族共有23个成员,分别命名为FGF1-23。本实验旨在探讨bFGF在大鼠MF中的表达。

1 材料与方法

1.1试剂与仪器盐酸异丙肾上腺素注射液(Iso),由上海禾丰制药有限公司生产;羊抗大鼠FGF单克隆抗体,由博士德公司提供;SP-9000免疫细胞化学试剂盒,由北京中杉金桥生物技术有限公司提供;莱卡4215切片机(德国);OlympusPM-10AO全自动显微照相装置(日本)。

1.2实验动物及分组雄性Wistar大鼠20只,体重180-220 g,由吉林大学实验动物中心提供。分为正常对照组及Iso组(包括12 h,72 h及1周组),每组5只。

1.3HE组织化学染色取材经10%福尔马林固定30 min,常规石蜡包埋。用二甲苯脱腊10 min,用100%乙醇置换二甲苯2 min、95%乙醇置换1 min、80%乙醇置换1 min及用75%乙醇置换1 min,蒸馏水冲洗2 min。苏木素染色5 min,自来水冲洗。盐酸乙醇分化30 s。自来水浸泡15 min。伊红染 2 min。常规脱水,透明,中性树胶封闭剂封片。

1.4bFGF蛋白组织化学染色石蜡切片,常规脱蜡至水。蒸馏水冲洗,PBS浸泡5 min。3%H2O2去离子水(无色液体)孵育5-10 min,以消除内源性过氧化物酶活性。滴加试剂A(蓝色液体)室温孵育10-15 min,倾去,勿洗。滴加适当比例稀释的一抗,4℃过夜。PBS冲洗,3 min×3次。滴加试剂B(黄色液体),室温或37℃孵育10-15 min。……