杨 柳,苏明权,马越云,焦 刚,常 亮,肖凤静,李 明,彭年才,郝晓柯*

(1.第四军医大学西京医院全军临床检验医学中心,陕西西安710032;2.西安天隆科技有限公司,陕西西安710043)

沙门氏菌是一种常见、重要的人兽共患病原菌,在公共卫生学上具有重要意义[1]。沙门氏菌是主要的肠道致病菌,易引起食物中毒。在我国,以沙门氏菌引起的食物中毒占细菌性食物中毒的首位[2]。目前对食品中的沙门氏菌检测手段仍采用常规生物学培养鉴定法辅以抗原和抗体的免疫学检测技术,病原微生物分离培养、生理生化鉴定、血清分型和免疫酶等表型特征检测方法,常规方法繁琐、耗时耗力,不能满足日益发展的需要。因此,为有效地预防和控制疾病发生,建立快速、敏感而又特异的检测沙门氏菌的方法是非常必要的。本研究根据沙门氏菌全基因组中fimY基因序列设计特异性引物和探针,采用实时荧光定量PCR技术,建立沙门氏菌实时荧光定量PCR检测方法,为食源性沙门氏菌污染的快速检测提供方法学支持。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1实验菌株 伤寒沙门氏菌(ATCC14028)购自中国菌种保藏中心;大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、白色念珠菌、福氏痢疾志贺氏菌、肠球菌为本科经临床分离鉴定后的保存菌株。

1.1.2仪器和试剂 所用仪器为美国ABI公司的PE7700型基因定量扩增仪和西安天隆科技有限公司的TL580型荧光定量PCR仪;主要试剂为PCR Mix、Taq酶、dNTP、细菌基因组DNA 抽提试剂盒均购自TaKaRa公司。

1.1.3引物和探针的设计与合成 采用沙门氏菌fimy基因序列[4]设计引物和探针,以FAM为报告基团,以TAMRA为淬灭基团,引物和探针均由TaKaRa公司合成。……