常灵竹，苗丽娟

（吉林农业科技学院，吉林 吉林 132101）

猪血凝性脑脊髓炎是由猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）引起仔猪的一种急性、高度接触性传染病。临床上以仔猪呕吐、衰竭或明显的神经症状为主要特征[1]。主要侵害3周龄以下的乳猪，病程约10日，被感染仔猪的发病率和致死率都可达100%，成年猪呈隐性感染。该病目前尚无特效疗法和有效疫苗，多数流行地区处于呼吸道亚临床感染状态。母源抗体可保护仔猪不受该HEV的侵害。未获得母源抗体的仔猪，可在初生后注射高免血清建立被动免疫[2-7]。诊断和治疗用血清所含的抗体主要为IgG，而IgG在疾病诊断治疗方面的应用越来越广泛，制备高纯度的抗体显得尤为重要。本试验拟利用家兔制备抗猪血凝性脑脊髓炎的高免血清，并利用高免血清制备和提纯IgG。

1 材料与方法

1.1 试验动物

家兔购自吉林大学实验动物中心。

1.2 细胞和病毒

HEV和猪肾细胞（PK-15细胞）由吉林大学病理实验室提供。

1.3 HEV的培养与纯化

采用单层吸附接毒法繁殖HEV，用10%的MEM培养PK-15传代，待细胞长成单层后，倾弃营养液，加入HEV，37℃吸附1 h，然后加入2%维持液，置于37℃5%CO2的细胞培养箱中培养，待细胞出现＞80%的病变时，将细胞培养瓶放入冰箱中，经反复冻融2～3次后，将细胞液集合在同一个固定的容器中，置于-20℃保存备用[8]。最后将大量收取的病毒液溶化，将病毒液放入到无菌的离心管中，6000 rpm、4℃离心30 min，取上清，再用20000 rpm、4℃离心3 h，收集病毒沉淀，用TNE溶解，用0.22 μm滤膜过滤，保存于-80℃备用。测定纯化后HEV感染力的滴度，根据Reed-Muench方法计算HEV的TCID50[9]。……