程小媛

江苏常州市肿瘤医院神经内科 常州 213001

脑血管病是危害人类健康和生命最常见的疾病之一。血管内皮位于血管的最内层，直接与循环血液接触，较易受到血液中的活性物质及血液的剪切力的影响。在许多病理情况下，如脑缺血再灌注导致机体产生大量的氧自由基，而内源性清除自由基能力下降，使机体的氧化－抗氧化机制失衡而导致细胞死亡。近来研究表明促红细胞生成素作为一个新的神经保护因子，其神经保护作用已成为新的研究热点。外源性EPO能减轻局灶性脑缺血、脑外伤、脑炎及脊髓损伤等动物模型的神经细胞损伤，但国内外相关报告多集中于对神经元的保护研究。我们采用体外培养人脐静脉内皮细胞建立过氧化氢（H2O2）诱导的内皮细胞氧化损伤模型，观察重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin，rhEPO）对氧化损伤血管内皮的保护作用，阐述rhEPO对血管内皮细胞的保护机制。

1 材料

1.1 药品和试剂 重组人促红细胞生成素（rhEPO）购自沈阳三生制药公司，Annexin V－FITC细胞检测凋亡试剂盒购自晶美生物技术公司，1640培养基购自美国Gibco公司，胎牛血清购自杭州四季青公司，胰蛋白酶、二甲基亚砜（DMSO）、4－甲基偶氮唑蓝（MTT）购自美国Sigma公司，MDA和SOD试剂盒购自南京建成研究所，H2O2购于天津市天釜化工有限公司。

1.2 细胞 人脐静脉内皮细胞株。

2 方法

2.1 内皮细胞培养 人脐静脉内皮细胞（HUVEC）解冻复苏，培养于含10%胎牛血清的培养基，置于37℃，5%CO2的培养箱中。至细胞融合至80%，用0.25%的胰酶消化，传代后接种于培养瓶和孔板中，待细胞融合至70%用于实验。……