沈 萍，王喜军

（1.湖南生物机电职业技术学院动科系，湖南 长沙 410127；2.长沙市动物防疫监督站，湖南 长沙 410012）

猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）为革兰氏阴性杆菌，可引起猪传染性胸膜肺炎（porcine contagious pleuropneumoniae，PCP），该病由 Pattison 首次报道，现已在美国、墨西哥、瑞士、丹麦、澳大利亚、加拿大、泰国、韩国、日本等国家广泛流行[1-2]；该病在我国也早已广泛存在，并有扩大蔓延之势。APP血清型较多，我国猪场中存在的就有 3、5、7、8、10 型，其中以3型和7型为最多[3]。发病时，病猪出现心衰和循环障碍，精神委顿，食欲废绝；晚期出现严重的体温下降和呼吸困难；临死前从嘴、鼻孔流出血性泡沫样液体。病猪于发病后24～36 h内死亡，死亡率高达80%～100%[4]。

16S rRNA为原核生物的一种核糖体RNA，在漫长的生物进化过程中，因其受到的选择压力小，基因序列变化缓慢，可以用来标记生物的亲缘关系和进化距离；在结构与功能上具有极为高度的保守性，素有“细菌化石”之称[5]。鉴于APP有很多血清型，且各血清型之间缺乏相互的交叉保护性，很大程度就是因为其不同血清型的外膜蛋白基因、功能基因存在一定差异，因此，选择APP的16S rDNA基因设计引物，对在湖南分离到的长沙（CS）株的16S rDNA基因进行了克隆和测序；并与已报道的血清3、5、7型做序列比对，进行同源性分析。为APP分子流行病学调查、亲缘性关系的研究提供资料，同时为APP的监控奠定基础。

1 试验部分

1.1 材料

1.1.1 病料来源 存于湖南生物机电职业技术学院动科系动物微生物实验室的猪胸膜肺炎放线杆菌病料。

1.2.1 引物设计 根据GenBank登录的APP的16S rDNA基因序列，利用生物软件Primer 5.0，设计1对特异性引物，扩增片段长度为827 bp，由南京金思特生物科技有限公司合成，合成后稀释为终浓度20 pmol/L，置-20℃保存。……