姚虎胜，易 克，杨陟华，朱茂祥

（1.湖南农业大学生物科学技术学院，湖南 长沙 410128；2.湖南中烟工业有限责任公司原料采购中心，湖南 长沙 410014；3.军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京 100850）

肺癌是人类最常见的恶性肿瘤,已成为目前癌症死亡的首要病例。流行病学调查表明，多种人类广泛接触的因素与肺癌的发生有关[1]，目前公认吸烟是引起肺癌的首要因素[2]。现代生物学试验与流行病学研究表明，肿瘤发生与细胞基因突变有关，其发展呈阶段过程，即启动、促癌和发展等3个过程。因此，从基因水平上研究支气管上皮细胞对卷烟烟气的反应及细胞的恶性转化过程是肿瘤研究的关键所在。研究表明，TG2参与多种生理过程且与多种疾病尤其是肿瘤的发生发展有关[3-5]，目前对TG2的研究主要集中在肿瘤发生后，研究对肿瘤的转移与浸润、治疗及预后的影响，所用材料大多都是肿瘤细胞[6-8]。本试验所用材料为恶性转化的支气管上皮细胞，研究的时期为肿瘤发生的早期事件（即细胞的恶性转化阶段），以期为吸烟致肺癌的早期诊断提供一些依据，同时也提供一个肿瘤早期治疗的分子标靶。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

LHC-8完全培养液（美国Gibical公司）；Kentukey Reference 2R4F卷烟（University of Kentucky）；TG2一级抗体（Abcam公司）；TG2活性检测试剂盒（Sigma公司）；增殖检测试剂盒（Invitrogen公司）；凋亡检测试剂盒（invitrogen公司）；CO2细胞培养箱（Thermo公司）；酶标仪（BIO-RAD 860）；流式细胞仪（FACSCalibur，BD Bioscience公司）

1.2 试验方法

1.2.1 卷烟烟气总粒相物（TPM）的制备 TPM收集方法参考按国家标准GB/T 5606.1-2004、GB/T19609-2004、GB/T 16447-2004。所需受试样品抽吸完后，空吸3口，剑桥滤片（直径44 mm）收集TPM，用DMSO溶解备用，调整浓度为10 mg/mL。……