张 楠，谢 放

（兰州交通大学化学与生物工程学院，甘肃 兰州 730070）

目前选育高品质植物品种主要采用的是分子标记辅助育种方法，因而怎样获得高质量的基因组DNA用于后续的分子标记将显得非常关键。番茄中含有较多的多糖和其他次生代谢产物（酚、酯、萜、色素等）[1]，这给高质量的DNA提取带来较多的困难。尤其是多糖、色素、蛋白质成分是影响DNA纯度最常见的问题。如何做到在去除污染物又能相对保持高的产量的同时，对大批量的模板进行提取，一直是像番茄这类含多糖、色素和盐类物质较多的植物所探讨的问题。

在加工番茄分子标记辅助育种时，多采用CTAB法[2]、SDS法及DNA试剂盒[3-4]等提取番茄DNA，效果均不太理想。通过试验比较多种提取方法，得到一种适用于提取大批量加工番茄DNA的方法——改进CTAB法。通过此法克服了番茄中富含多糖、蛋白质、酚和色素的影响，所得DNA通过凝胶电泳和分子标记均获得了满意的结果，可以将此方法在富含上述物质的植物中推广使用。

1 材料与方法

1.1 试验材料

加工番茄叶片于2010年7月采摘于兰州交通大学科技园试验田。将采摘的幼嫩叶片和老叶片分别装入塑料袋置于冰盒中带回实验室，置于-20℃备用。

1.2 药品与试剂

引物序列：随机引物S636（GGGATATCGC），ISSR 引物 855（ACACACACACACACACYT）上述引物由上海生工生物工程公司合成。

CTAB 提取液：含 2%CTAB，1.4 mol/L NaCl，0.2%β-巯基乙醇，20 mmol/L EDTA，100 mmol/L Tris-HCL pH 值 8.0，PVP，10 mg/mL RNase；TE 缓冲液：含 10 mmol/L Tris-HC1，l mmol/L EDTA（pH 8.0）；饱和酚∶氯仿∶异戊醇（V∶V∶V）=25∶24∶1，氯仿︰异戊醇（V∶V）=24∶1；50×TAE 缓冲液：1 L 缓冲液中含有242.0 g Tris碱，57.1 mL冰乙酸，200 mL 0.5 mol/L EDTA，pH 值 8.0。

1.3 仪器

TGL-20M高速冷冻离心机（湖南湘仪）；紫外分析仪（北京六一仪器厂）；……