周 琳，张连峰，李伟芳，史成章

郑州大学第一附属医院消化科，河南郑州450052

由于早期诊断率低，多数胰腺癌在诊断时已处于中晚期，能够手术切除的病例不足10%［1］。近年来联合应用化学治疗和分子靶向药物治疗日益受到人们的关注。血管紧张素转化酶Ⅱ(ACE2)是近年来发现的肾素-血管紧张素系统(RAS)新成员。新近的一些研究证实ACE2的表达缺失可能与肿瘤的发生发展有关，而且初步证实ACE2可能是一个抑癌基因［2］。我们先前的研究发现胰腺癌组织中存在ACE2表达下调甚至缺失，且 ACE2可抑制胰腺癌细胞增殖，提示ACE2功能缺失参与了胰腺癌的发病过程［3］。本研究通过建立稳定高表达ACE2的胰腺癌细胞株，旨在探讨ACE2在体外对胰腺癌细胞化学治疗敏感性的影响，并初步探讨其可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 细胞和细胞培养 人胰腺癌细胞株SW1990购自中科院上海细胞生物研究所，培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基(美国Gibco公司)，在37℃、5%CO2饱和湿度条件下传代培养，每天换液以保证细胞浓度维持在(2～4)×105的最佳生长状态，台盼蓝检测细胞活力＞90%，选用对数生长期细胞进行实验。吉西他滨(美国Lilly公司)溶解于无菌PBS中，制备为100 μmol/L储备溶液，4℃保存。

1.2 细胞转染 ACE2表达质粒(pReceiver-M02-ACE2)与空白对照质粒(pReceiver-M02-GFP)由课题组前期构建。按照Polifect转染试剂盒(美国Qiagen公司)说明书操作，具体方法:转染前一天将3×105细胞接种到6孔板中。转染时将ACE2质粒和对照质粒DNA 各 0.4 μg/孔和 10 μL Polifect转染试剂混合，加入500 μL/孔Optimen无血清培养液，孵育4 h，之后更换为完全培养液，细胞在37℃、5%CO2条件下培养。……