王 政，罗和生

武汉大学人民医院消化内科，湖北武汉433600

随着人民群众生活方式及饮食习惯改变，结肠癌发病率逐渐上升，成为仅次于肺癌、胃癌的居第三位的恶性肿瘤，对结肠癌发病机制的研究受到重视。近年流行病学研究表明，血清脂联素含量变化与某些恶性肿瘤如食管癌、胃癌、子宫内膜癌、乳腺癌、结肠癌的发生发展存在一定联系［1-5］。基础研究也证实脂联素可以抑制乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、胃癌细胞的增殖［6-9］。本实验以体外培养的人结肠癌HT-29细胞为观察对象，观察不同浓度脂联素对HT-29的生长及凋亡作用，为结肠癌的发病机制和治疗提供新的理论依据。

1 材料与方法

1.1 细胞系和试剂 HT-29细胞购自中南大学湘雅医学院细胞中心，RPMI 1640购自杭州吉诺公司，胎牛血清购自Gibco公司，人重组脂联素蛋白购自Peprotech公司，MTT购自Sigma公司，AnnexinV-FITC试剂盒购自碧云天公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养:人结肠癌细胞系HT-29细胞培养按ATCC培养方法，用RPMI 1640培养基培养，培养基中加入100 mL/L胎牛血清、100 IU/mL青霉素，100 IU/mL链霉素，在37℃、100 mL/L CO2的饱和湿度培养箱内培养;每10 d传代一次。正常生长状态下HT-29细胞形态为上皮样，单层贴壁生长，丧失接触抑制与密度抑制。取对数生长期细胞进行实验，用0.2%台盼蓝拒染方法鉴定细胞活力＞90%。

1.2.2 MTT法检测细胞生长增殖活性的影响:以每孔1×104个细胞接种于96孔培养板中，培养过夜。加不同浓度全长脂联素(终浓度分别为0.01、0.1、1.0、10 mg/L，每组每个浓度点设4个平行孔;分别继续培养24、48 h。每孔加入 MTT溶液(5 g/L)10 μL，37℃孵育4 h后，每孔加入100 μL Formanzan溶解液37℃孵育4 h;用多功能酶标仪在570 nm处测定吸光度(OD值)，计算抑制率。……