吴卉

目前感染乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)的检测方法主要有 ELISA法检测免疫学血清标志物和荧光定量PCR法检测 DNA。ELISA法主要检测 HBV血清标志物，即乙肝五项(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)，反映病毒的表达水平，也间接地反映了病毒复制水平，在乙型肝炎的病因分析、疾病进程和预后判断上有着不可替代的作用，是临床诊断、治疗、分析和判断HBV感染者病程及传染性的重要依据。荧光定量PCR法检测的是体内病毒的拷贝数，具有高度的灵敏性和特异性，并且重复性好、检测范围宽，其目的主要是判断目前患者病毒复制程度的大小、传染性大小，尤其在判断乙肝的转归以及用药前后的疗效判断上有很重要的作用，同时也是重要的抗病毒治疗用药指征之一。

本研究就以上两种方法对HBV检测结果进行分析，以探讨ELISA法与PCR法检测结果的相关性及不同的临床意义，从中了解乙型肝炎感染情况，为临床判断乙型肝炎患者病情和疗效观察提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2008年6月至2009年6月间吉林省医院住院及门诊乙型肝炎患者500例，其中男334例，女166例，年龄10～70岁，诊断符合2000年9月西安全国传染病寄生虫病学术会议修订《病毒性肝炎防治方案》所定的标准［1］。同时收集100例乙肝病毒标志物全阴性的健康体检者血清标本作为对照组。根据检出的常用模式将研究对象分为10组，见表1的分组栏(每组中的项目均为阳性)。

1.2 试剂与仪器 ELISA检测试剂由上海科华生物技术有限公司提供。HBV DNA含量检测试剂盒由深圳匹基生物技术开发有限公司提供。罗氏荧光定量PCR仪LightCycler。

表1 ELISA检测HBVm和FQ-PCR检测HBV DNA的结果

1.3 实验方法 HBV DNA含量检测及乙肝病毒感染血清学标志物检测均严格按照试剂盒说明书要求进行。

1.4 统计学方法 采用 SPSS11.0统计软件统计分析，HB-sAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)组与其他各组的比较采用χ2检验，P＜0.05具有统计学意义。

2 结果

通过 χ2检验发现 HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)组患者血清HBV DNA阳性检出率明显高于除 HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb-IgM(+)组以外的其他各组(P＜0.001)见表1。HBeAg和HBV DNA阳性检出率见表2。

表2 HBeAg和HBV DNA阳性检出率比较

3 讨论

实验结果表明，HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)组患者血清HBV DNA的阳性检出率最高，为91.8%，经统计学处理与其他各组比较差异有统计学意义(P＜0.001)，说明HBsAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)患者 HBV DNA 具有较高的复制水平，是具有传染性的重要标志。这一结果还说明HBeAg阳性与HBV DNA阳性存在一致性。值得注意的是，在HBeAg阳性患者血清中仍有13例HBV DNA结果为阴性，考虑可能是由于患者体内HBV DNA复制水平低，而在此之前所表达的HBeAg尚未被完全降解，仍处于较高水平，故形成了HBV DNA与HBeAg时相分离的现象［2］。这就提示仅以HBV DNA的检测来判断是否感染可能存在漏诊的情况。

180 例 HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)组患者血清HBV DNA阳性检出率为 38.3%;57例 HBsAg(+)、HBcAb(+)组患者血清HBV DNA阳性检出率为59.7%，这一结果说明 HBeAg阴性、HBeAb或 HBcAb阳性者仍可以有 HBV DNA阳性检出，提示患者体内仍有 HBV存在或复制，故HBeAg的消失，HBeAb或HBcAb的出现并不能代表病毒停止复制或病情好转，只能说明复制水平的降低。分析其原因可能与HBV发生前C区基因突变或机体发生特异性的免疫耐受有关［3］。

31例 HBsAb(+)患者中 HBV DNA阳性率为9.7%，其原因可能为:长期多次反复小剂量接触 HBV未见或少见发病，出现 HBsAb(+)，但体内仍可存在低拷贝的HBV颗粒;或者存在其他 HBV血清学亚型感染［4］。

阴性对照组也检出8例 HBV DNA阳性，检出率为8.0%，其原因可能是:①HBV发生前C区基因突变或机体发生特异性免疫耐受有关。②HBsAg确已清除，但 HBV DNA仍持续存在［5］。③PCR方法存在假阳性。

综上所述，FQ-PCR和ELISA两种检测方法具有良好的相关性和互补性。长春市的500例患者各模式分组中HBsAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)组患者血清 HBV DNA 阳性检出率和含量明显高于其他各组。HBeAg和HBV DNA阳性检出率有较高的一致性。

［1］病毒性肝炎防治方案(试行)(2000年西安全国传染病寄生虫病学术会议修订).中华传染病杂志，2000，8(6):324.

［2］丁柳，刘丽，雷学忠.5600例血清标本乙肝病毒 DNA定量与免疫学标志物检测的对比分析.四川大学学报(医学版)，2006，37(2):313.

［3］朱传武.HBV前C/C基因变异与宿主T细胞免疫的关系.国外医学免疫学分册2001，24(6):289.

［4］朱艳宾，刘增佑.乙型肝炎孕妇早期血清 HBV DNA含量与胎儿宫内感染关系研究.河北医药，2008，30(12):1928-1929.

［5］汤立新.血清HBV DNA荧光定量 PCR检测与乙肝病毒标志物模式的相关性.职业卫生与病伤，2007，22(2):141.