杨旭东 张 杰 包海花

糖尿病性视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）是糖尿病的主要慢性并发症之一，也是常见的视网膜血管病，其发病机制尚不十分明了。细胞凋亡在DR发生发展中的作用已逐渐受到大家的重视。牛膝系苋科牛膝属植物，入肝、肾经，具有补肝肾、强筋骨、引血下行之功效。现代药学研究认为牛膝具有降血糖、利尿，以及抗肿瘤和增强免疫功能等多种药理作用〔1，2〕。本实验对牛膝多糖对糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用及其机制进行了初步研究，为临床应用牛膝多糖治疗糖尿病视网膜病变提供理论及实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物：鼠龄为6周的普通级Wsitar大鼠50只，雄性，200～250 g（动物合格证号：SYXK 黑 2006-033），由哈尔滨医科大学动物中心提供。

1.1.2 试剂：RT-PCR试剂盒，大连德宝生物有限公司；链脲佐菌素（streptozocin，STZ），美国 Sigma 公司；牛膝多糖（achyranthes bidentata blume polysaccharides，ABPS）由牡丹江医学院中心实验室提供。

1.2 方法

1.2.1 造模及分组：随机选取10只Wsitar大鼠作为正常对照组（A组），予基础饲料。其余40只制作糖尿病大鼠模型：以高热量饮食喂养8周后，尾静脉注射 STZ（15 mg/kg），48 h后检测空腹血糖，血糖在11.1～33.3 mmol/L（不含 33.3 mmol/L），且伴有糖耐量减退者即为造模成功。A组基础饲料饲养8周后，注射与STZ（15 mg/kg）同体积的柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液。造模成功的40只大鼠随机分为4组，每组10只：糖尿病模型组（B 组）、ABPS高剂量组（C 组）、ABPS中剂量组（D组）、ABPS低剂量组（E组）。造模成功后48 h，B组给予生理盐水灌胃，C、D、E组给予不同剂量 ABPS 灌胃治疗，给药剂量分别为300mg·kg-1·d-1、200mg·kg-1·d-1和 100mg·kg-1·d-1。 给药治疗 12 周后，取材处死。

1.2.2 标本制作：10%水合氯醛0.3 ml/100 g左下腹腔注射使大鼠麻醉，迅速分离眼球，剪断视神经，摘除双侧眼球，迅速将眼球壁用针头固定在冰台上，在显微镜下取出双眼视网膜，将同1只大鼠2眼视网膜合一，编号，置于-70℃冰箱保存，用于RT-PCR及DNA ladder检测。……