栾兆倩 高健生 接传红 宋剑涛 严 京 吴正正 郭欣璐 陈子燕

糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）是糖尿病严重的并发症。新生血管形成是其重要病理变化之一。DR新生血管形成实质上是细胞增殖失控的过程。其中起主要作用的细胞是内皮细胞（endothelial cell，EC）。 血管内皮生长因子 （vascular en dothelial growth factor，VEGF）是最直接的血管内皮细胞促分裂素。它除了能促进内皮细胞的增殖、迁移和血管形成外，还具有提高血管通透性、改变细胞外基质、上调细胞间粘附分子1（intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1）表达〔1-4〕等功能。 在缺氧状态下，VEGF的表达升高是由缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1，HIF-1α）调控的〔5，6〕。 随着对HIF-1α及糖尿病视网膜病变的深入研究，认为它可能是糖尿病视网膜病变中最为关键的因子之一。密蒙花方是导师高健生研究员多年临证总结的有效治疗DR的经验方。本实验拟从细胞分子水平探讨该方对缺氧状态人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial，HUVEC）增殖及 HIF-1α 表达的影响，为寻求有效防治糖尿病视网膜新生血管的药物提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 试剂：RPMI1640培养基购自美国Gibco公司，胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）购自杭州四季青生物工程有限公司，胰蛋白酶、CoCl2购自美国Sigma公司，PBS购自北京中杉金桥科技有限公司，兔抗人HIF-1α多克隆抗体、即用型SABC免疫细胞化学染色试剂盒均购自北京博奥森生物工程有限公司。二氨基联苯胺显色剂（DAB）、苏木素染色液均购自福州迈新生物工程有限公司。四甲基偶氮唑盐（MTT）购自美国Amresco公司。

1.1.2 细胞来源：人脐静脉内皮细胞株为中国中医科学院医学实验中心形态学实验室馈赠。

1.1.3 中药来源：中药材购自北京燕北药材公司，经我院药房鉴定为道地药材。……