张 帆，王淑敏

（长春中医药大学，吉林 长春 130117）

大马勃Calvatia gigantean(Batsch ex Pers)Lloyd为中药马勃的来源之一，具有止血、解毒、清肺、消肿、利喉等功效，可治疗咳嗽、咽喉肿痛、扁桃体炎、外伤出血。由于野生资源不足，为扩大药源，本实验拟通过对大马勃摇瓶发酵培养基进行初步研究，为液体深层发酵工艺研究以及规范化、工厂化生产提供理论依据[1]。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

大马勃Calvatia gigantean(Batsch ex Pers)Lloyd斜面菌种，由长春中医药大学药用真菌研究所提供。

1.2 药品和试剂

葡萄糖、蔗糖、木糖、乳糖、蛋白胨、酵母粉、尿素、硫酸铵、硝酸铵、硫酸镁、磷酸二氢钾、碳酸钙、磷酸二氢钠、维生素VB1、3,5-二硝基水杨酸试剂 （DNS）、盐酸、氢氧化钠，以上均为分析纯，麦麸、豆饼粉、玉米粉。

1.3 试验仪器

HYG-III迴转式恒温调速摇瓶柜 （上海新星自动化控制设备成套厂）；721紫外可见分光光度计 （上海第三分析仪器厂）；101-1A型数显电热鼓风干燥箱 （上海沪南科学仪器联营厂）；超净工作台 （苏州净化设备厂）；YXQGO-280手提式高压蒸汽消毒器 （丹东市日用五金厂）。

1.4 试验方法

1.4.1 菌种培养及指标测定

斜面菌种活化后，在无菌条件下，接入250 mL三角瓶 （培养基装量100 mL）中，接种量为10%，在摇瓶机中培养，培养温度为25℃，转速为150 r·min-1，摇瓶培养16 d，取出，过滤，将菌球烘干并称其重量，发酵液则通过3,5-二硝基水杨酸法测定其中多糖的含量。

1.4.2 碳源选择试验

以马铃薯汁20%、蛋白胨2%、KH2PO40.15%、MgSO40.10% （pH自然）作为基础培养基，碳源分别为空白、葡萄糖3%、蔗糖3%、玉米粉汁5%、乳糖3%、麦芽糖3%。每种培养基平行做3次，进行指标测定。

1.4.3 氮源选择试验

以马铃薯汁 20%、蔗糖3%、KH2PO40.15%、MgSO40.10% （pH自然）作为基础培养基，氮源分别为空白、蛋白胨2%、酵母膏0.5%、豆饼粉汁5%、黄豆粉汁3%、硝酸铵0.2%、麦麸汁5%、硫酸铵0.2%、牛粪汁5%，每种培养基平行做3次，进行指标测定。……