陈洪涛，雷春亮，李宝金，杨承祥，李 恒

(1.广州市第八人民医院，广东广州 510060;2.佛山市第一人民医院，广东佛山 528000)

细胞外信号调节激酶(ERK1/2)是丝裂原活化蛋白激酶超家族成员，在介导细胞分化、增殖、存活中起重要作用，可被多种信号激活［1］。在对再灌注损伤心肌保护机制的研究中，ERK1/2的激活可能起着重要的作用。挥发性麻醉药后处理是近年来提出的一种对减轻再灌注损伤具有较大临床意义的新方法［2］。研究表明，同缺血预处理［3］、药物预处理［4］以及前几年提出的缺血后处理［5］一样，七氟烷等吸入麻醉药能模拟缺血后处理，对再灌注损伤心肌具有保护作用［6］。七氟烷是一种麻醉性能优越，目前被认为接近“理想”的新型吸入麻醉药，人们对其后处理心肌保护机制的研究尚处于初级阶段。本实验旨在研究七氟烷对缺血/再灌注心肌细胞ERK1/2活性的影响，探讨其心肌保护作用的可能机制。

1 材料与方法

1.1药物及试剂七氟烷(sevoflurane，批号7129，丸石制药株式会社);2，3，5-氯化三苯基四氮唑(2，3，5-triphenyltetrazolium chloride，TTC;Sigma，USA);PD98059(Sigma，USA);DMSO(衢州市瑞尔丰化工有限公司，批号20100210);Western细胞裂解液、SDS/PAGE蛋白上样缓冲液(5×)、SDS/PAGE凝胶配制试剂盒、BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒(江苏海门市碧云天生物技术研究所);鼠单克隆抗磷酸化 ERK1/2［Phospho-p44/42 MAP Kinase(Thr202/Tyr204)(E10)Mouse mAb］和总的ERK1/2［p44/42 MAP Kinase(L34F12)Mouse mAb］抗体、兔多克隆抗磷酸化p70S6K〔Phospho-p70S6 Kinase(Thr421/Ser424)Antibody〕和总的 p70S6K(p70S6 Kinase Antibody)抗体(Cell Signalling Technology，USA);碱磷酶标记抗小鼠、碱磷酶标记抗兔IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司)。PD98059按说明书要求溶于DMSO(6.5 g·L-1)。

1.2动物选择与分组SPF级SD♂大鼠，体质量250～300 g［中山大学实验动物中心提供，实验动物许可证号:SYXK(粤)2007-0081］。(1)评估七氟烷……