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五味子乙素对染矽尘大鼠肺组织一氧化氮水平和诱导型一氧化氮合酶mRNA表达动态变化的影响

2011-05-29樊林花刘田福刘茂林

中国药理学通报 2011年2期
关键词:肺纤维化

樊林花,刘田福,郭 民,刘茂林

(山西医科大学实验动物中心,山西太原 030001)

石英粉尘可使机体产生大量活性氧自由基(ROS),而使机体处于氧化应激状态,诱发巨噬细胞释放大量细胞因子、炎症介质[1]。一氧化氮(nitric oxide,NO)作为一种氧化剂、一种炎症介质在氧化应激和组织损伤过程中的作用已得到越来越多证明[2]。体内过量NO主要由诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)催化产生[3]。iNOS基因上游有多种核转录位点,其中最主要的是核转录因子(NF-κB)结合位点[4],前期研究表明,Sch-B对染矽尘大鼠肺损伤有保护作用[5],可抑制NF-κB的活化[6],我们推测 Sch-B可能参与 iNOS的表达过程。为进一步探讨其抑制染矽尘大鼠肺损伤的作用机制,本实验观察了Sch-B对染矽尘大鼠肺组织NO水平和iNOS表达的动态变化的影响。

1 材料与方法

1.1主要试剂Sch-B(成都曼斯特生物科技有限公司,纯度 >98%);SiO2(美国 Sigma公司,纯度99%;用生理盐水配成50 g·L-1混悬液经高压蒸汽灭菌后,用前加青霉素20 000 U·L-1);RNAiso Plus总RNA提取试剂、RT试剂盒、Taq酶和dNTP(宝生物工程大连有限公司);iNOS和GAPDH引物序列由北京奥科生物公司合成;NO试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2主要仪器PTC-200PCR仪、水平电泳仪、凝胶成像分析仪(美国Bio-Rad公司),微量离心机(德国eppendorf公司),高速冷冻离心机3-18K(美国Sigma公司),莱卡切片机(德国Laica公司),显微镜(日本Olympus公司),T6新世纪型紫外可见光分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)

1.3动物分组、模型建立及标本的收集选用我中心前期复制的大鼠实验性矽肺模型石蜡块,共96例。对照组(Control)、染矽尘组(Silica)和Sch-B组(Sch-B)各32例,采用暴露式气管内注入法染尘,染矽尘组和Sch-B组每只大鼠注入1 ml SiO2混悬液,对照组注入1 ml灭菌生理盐水。……

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