宋 军， 赵军宁， 王晓东， 戴 瑛， 邓治文， 易进海

(四川省中医药科学院药理毒理研究所，国家中医药管理局中药质量生物学评价重点研究室，中药品质评价与中药四川省重点实验室，四川成都 610041)

芍药甘草汤出自东汉张仲景《伤寒论》太阳病篇，由芍药、甘草组成。能益阴柔肝，缓急止痛，将其用于治疗急慢性肝炎，有较好的疗效［1-2］。我们以芍药甘草汤为基础方，经提取、分离纯化得到芍药甘草汤有效部位群(简称DSM)，含芍药总苷、甘草酸和总黄酮苷总计54.7%，为治疗慢性乙型病毒性肝炎的新型有效的中药复方有效部位群制剂［3］。先前我们已经报道了DSM能降低CCl4亚急性肝损伤大鼠肝脏白细胞介素和 TNFα含量［4］，对乙型肝炎病毒［5］和实验性肝纤维化具有显著抑制作用［6］。本实验报告DSM对正常大鼠胆汁流量和小鼠异硫氢酸-1-奈酯黄疸模型胆红素和转氨酶的影响，探讨其利胆退黄作用。

1 材料

JA1003A电子天平(d=1mg)，上海精天电子仪器有限公司。赛多利斯电子天平(d=0.01mg)，德国;UV730半自动生化分析仪，日本岛津;TB、1 min胆红素、ALT、AST检测试剂盒，四川迈克科技有限公司。SD大鼠，一级合格，由国家医药局四川抗菌素工业研究所实验动物中心提供。DSM批号:010327:褐黄色粉末，由芍药-甘草(2∶1)组成，采用水提后大孔树脂纯化制备，含芍药总苷、甘草酸和总黄酮苷总计54.7%。1 g药粉相当于原生药15.38 g。

2 方法与结果

2.1 对正常大鼠胆汁流量的影响

2.1.1 方法［7］取SD大鼠50只，按体质量随机分成5组，每组10只。设正常对照组和阳性对照组(舒胆通0.024 g/kg，相当于临床每日推荐剂量的12倍)，受试药物3个剂量组(DSM 88、264、528 mg/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的4、12、24倍)。采用等容积不等浓度药液十二指肠1次给药，0.5 mL/100 g体质量。各组实验前禁食不禁水12 h，实验时将大鼠以0.6%戊巴比妥钠0.5 mL/100 g ip麻醉后，仰位固定，沿腹正中线切开约2 cm，开腹找到胃幽门部在十二指肠降部肠系膜中找到白色有韧性的胆管，在其下穿2根丝线，结扎乳头部，向胆管方向作“v”型切口，插入塑料管，即可见淡黄色胆汁流出，结扎固定塑料管，用刻度试管收集胆汁。手术后用止血钳夹闭腹壁，以盐水纱布覆盖。待稳定20 min后，先收集30 min胆汁，然后各组大鼠分别由十二指肠给予相应的受试药物，给药后每30 min收集胆汁一次，共3次，记录胆汁流量，计算给药后胆汁流量增加的百分率。

2.1.2 结果 见表1。由表1可见，DSM大剂量组给药后30、60、90 min胆汁流量和胆汁流量增加率与对照组比较具有差异显著性(P＜0.05～0.01)，中剂量组给药后30 min胆汁流量和胆汁流量增加率与对照组比较具有差异显著性(P＜0.05 ～0.01)，小剂量组给药后30 min、60 min 胆汁流量增加率与对照组比较具有差异显著性(P＜0.05)，表明DSM对正常大鼠有增加胆汁流量的作用。

2.2 对异硫氢酸-1-奈酯黄疸模型的影响

2.2.1 方法［8］: 取昆明种小鼠按体质量随机分成7组。设正常对照组和阳性对照组(甘利欣0.112 5 g/kg，相当于临床每日推荐剂量的15倍，益肝灵57.75 mg/kg，相当于临床每日推荐剂量的15倍)，受试药物3个剂量组(DSM 88、264、528 mg/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的 5、15、30倍)。采用等容积不等浓度药液灌胃给药，0.1 mL/10 g体质量，每日1次，连续4 d，第3次给药后2 h以1%异硫氰酸-1-萘酯给小鼠 ig一次，0.1 mL/10 gB.W.，造型后45 h眼球取血，分离血清，测定血清总胆红素、1 min胆红素、ALT、AST。

表1 DSM对正常大鼠胆汁流量的影响

2.2.2 结果 见表2。由表2可见，DSM高、中剂量组对异硫氢酸-1-奈酯造成的小鼠实验性黄疸具有显著降低总胆红素、1 min胆红素作用，高剂量组对血清AST具有降低作用，表明DSM对异硫氢酸-1-奈酯黄疸造成的小鼠实验性黄疸模型有退黄作用。

表2 DSM对异硫氢酸-1-奈酯所致小鼠实验性黄疸模型的影响 ±s)

表2 DSM对异硫氢酸-1-奈酯所致小鼠实验性黄疸模型的影响 ±s)

注:与模型组比较(t检验或 t’检验)，*P ＜0.05;＊＊P ＜0.01。

组别 动物数/只剂量/mg(kg·d)ALT/(IU/L)AST/(IU/L)对照组 11 — 18.1±11.3＊＊ 162.2±43.1*模型组 9 — 133.4±95.2 578.6±299.6 DSM 10 88 ×4 84.9 ±74.6 456.8 ±291.8 DSM 10 264 ×4 69.1 ±48.3 382.4 ±178.4 DSM 10 528 ×4 80.4 ±68.4 278.4 ±135.8*甘利欣 10 110 ×4 73.2 ±55.1 388.6 ±237.0益肝灵 9 60 ×4 98.4 ±55.5 460.2 ±230.6组别 动物数/只剂量/(g/kg)1 min胆红素/(μmol/L)总胆红素/(μmol/L)对照组 11 — 2.2±1.5＊＊ 2.2±1.1＊＊9 60 ×4 27.4 ±32.8 34.6 ±41.3模型组 9 — 46.3±36.9 47.1±35.8 DSM 10 88 ×4 29.0 ±35.1 33.4 ±44.4 DSM 10 264 ×4 14.1 ±25.9* 14.8 ±18.4*DSM 10 528 ×4 8.4 ±12.4＊＊ 9.3 ±12.7*甘利欣 10 110 ×4 10.0 ±18.4* 10.9 ±19.2*益肝灵

3 讨论

临床［1］及实验研究［9］均表明，芍药甘草汤具有降低转氨酶、肝脏保护以及改善肝炎症状的作用。DSM也具有肝脏保护作用，对CCl4、D-GalN诱发小鼠急性肝损伤、LPS+BCG诱发的小鼠免疫性肝损伤等多种急性肝损伤(另文发表)及CCl4诱发的大鼠慢性肝损伤(肝纤维化)［5］具有明显对抗作用，并具有抗乙型肝炎病毒作用［6］。

肝损伤时由于肝功能受损，通常出现胆汁分泌、血清胆红素代谢及转氨酶异常。本实验研究表明DSM灌胃给药可以显著增加正常大鼠胆汁分泌量，对异硫氢酸-1-奈酯造成的小鼠实验性黄疸具有显著的退黄作用，表明本品具有利胆退黄作用，对于慢性乙型病毒肝炎治疗具有一定的意义，也为其“柔肝解郁”提供了一定的实验基础。

［1］梁炳根，莫尤美.芍药甘草汤治疗148例病毒性肝炎的临床观察［J］.上海中医药杂志，1989，(6):4-6.

［2］费迎明，陈炳潮.健肝乐颗粒剂治疗慢性乙型肝炎的疗效观察［J］.现代中西医结合杂志，1999，8(7):1078-1079.

［3］易进海，赵军宁.一种中药提取物及制备方法和应用 .中国，03117199.0 ［P］.2003-01-20.

［4］宋 军，赵军宁，王晓东，等.芍甘多苷对CCl4亚急性肝损伤大鼠肝脏白细胞介素和TNFα含量影响的实验研究［J］.成都中医药大学学报，2007，30(1):23-24.

［5］赵军宁，宋 军，王晓东，等.芍药甘草汤提取物(芍甘多苷)对大鼠CCl4慢性肝损伤(肝纤维化)的作用研究［J］.中药药理与临床，2009，25(2):8-10.

［6］戴 瑛，赵军宁，宋 军，等.芍药甘草汤有效成分群(芍甘多苷)抗乙型肝炎病毒作用的实验研究［J］.中药药理与临床，2009，25(3):36-39.

［7］陈 奇主编.中药药理研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社，1993:444-445.

［8］中华人民共和国卫生部药政局.新药(西药)临床前研究指导原则汇编［M］.1993:93.

［9］邸 琳，刘新宇，常福红，等.芍药甘草汤对小鼠急性肝损伤的保护作用［J］.中药药理与临床，2007，23(6):4-5.