刘 斌，戚 峰，季 兵，巩发才，刘 彤

大肠癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率居恶性肿瘤的前列，在全球呈上升趋势[1-2]。我们通过收集本院2008年4月—2009年3月经手术切除的60例大肠癌标本，研究大肠癌淋巴管密度与临床病理参数之间的关系，并应用基因芯片技术分析大肠癌组织淋巴管生成的可能调控基因，为大肠癌的靶向治疗提供分子生物学基础。

1 资料和方法

1.1 资料 本组共60例，男32例，女28例；年龄43～80岁，中位年龄67岁。根据肿瘤所在部位行相应的肿瘤切除及淋巴结清扫。所有标本均经病理学证实。手术前均未进行化疗、放疗、生物治疗等。

1.2 取材 标本均采集大肠癌组织、远癌切端肠组织黏膜，标本离体后取材并分为两部分，一部分置入液氮速冻后再置-80℃冰箱保存备用，另一部分置入10%中性福尔马林固定后进行石蜡包埋备用。

1.3 免疫组化染色及观察方法 将手术切除标本以抗Podoplanin抗体（Santa Cruz公司，1∶100稀释）为一抗进行免疫组化染色，按照Weidner等[3]报道的方法，先在低倍镜(×40)下扫视整个视野的肿瘤区域，选择其中的4个淋巴管密集区，然后在高倍镜(×200)下计数其淋巴管数目，取其平均值作为该例标本的LVD值。

1.4 基因芯片分析 将标本以LVD为标准分为高密度和低密度两组，每组随机选取2例标本。提取4个大肠癌组织样本mRNA，制备生物素标记的cRNA探针，与肿瘤基因芯片（OHS-802）杂交，采用化学荧光法检测特异基因表达水平，最后行图像采集与数据分析。芯片购自上海康成生物工程有限公司，包含有肿瘤抑制基因、致癌基因、信号转导分子、生长因子、生长因子受体和血管生成因子基因等480个靶基因点。……