高彦军 马景学 安建斌 刘丽娅 马红蕾 赵文静

增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy，PVR)是临床上常见的致盲性眼病之一，也是视网膜复位手术失败(占10% ～20%)的主要原因。近年来玻璃体视网膜显微手术已取得快速发展，但仍难以解决复发性视网膜脱离的问题，复发的原因通常是PVR。而视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial，RPE)细胞是PVR发病过程中关键性增殖细胞，抑制RPE细胞药物的研究日益受到重视。本研究将丹参单体(IH764-3)和三氟拉嗪两种作用机制不同的药物联合应用，验证其对RPE细胞增殖的抑制作用。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂 CO2孵箱:日本Sanyo公司;F-12培养基:美国Hyclone公司;二甲基偶氮唑盐(MTT):美国Sigma公司;丹参单体(IH764-3):中国医学科学院血液病研究所;三氟拉嗪:美国Sigma公司。

1.2 RPE细胞的分离培养与鉴定 RPE细胞的分离培养参考文献［1］，通过酶标法检测特异的细胞角蛋白鉴定，第3-5代细胞用于本实验。

1.3 生长曲线的测定 将RPE细胞制成悬液，以30×109L－1接种于24孔板内，每孔1 mL。轻微震荡使之充分混匀。接种后每隔24 h随机消化3孔，血细胞计数器计数，每孔计数4次，取其平均数，共计8 d。以时间为横坐标，细胞数目为纵坐标，绘制生长曲线。重复3次。

1.4 丹参单体、三氟拉嗪对RPE细胞增殖的影响

1.4.1 实验分组 取生长状态良好的第4代细胞，经2.5 g·L－1胰蛋白酶消化后，以 20 ×106L－1接种于96孔板内，每孔200 μL，每组6孔，轻微震荡使之充分混匀，常规培养48 h后进行分组。每组设6个复孔，全部操作重复2次。

空白对照组:用含有0.1 mol·L－1磷酸盐缓冲液以及含体积分数10%小牛血清的F-12培养液作为空白干预液;丹……