朱玉广 王 杰 吉艳艳 朱 艳 钟莹莹 杜孝楠 张 荣

青光眼小梁细胞和Schlemm管内皮细胞能特异性表达内皮白细胞黏附因子-1(endothelial leukocyte adhesion molecule-1，ELAM-1)［1］。在正常人眼小梁内皮细胞中，外源性白细胞介素-1α(interleukin-1α，IL-1α)可以刺激小梁细胞内源性IL-1α及ELAM-1的表达，活化核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)，模拟青光眼IL-1的持续表达状态［2］。在血管内皮细胞中，ELAM-1介导的细胞信号转导主要是通过丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase，MAPK)通路进行的，ELAM-1作为跨膜信号转导体，活化MAPK级联效应，形成Ras/Raf-1/磷酸化MEK复合物，引起c-fos表达上调［3］。我们推测，ELAM-1对小梁细胞的作用可能同时伴随MAPK信号通道的改变。为了验证此推测，我们设计此课题，以探讨青光眼的发病机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料 取新杀成年猪眼球，无菌条件下低温冰盒运回实验室，进行原代培养。

1.2 主要试剂 DMEM培养液、胎牛血清(GIBCO公司);兔抗人纤维连接蛋白(FN)多克隆抗体、兔抗人层粘连蛋白(LN)多克隆抗体、猪重组IL-1α(R＆D公司)、兔抗鼠多克隆免疫球蛋白G(Santa Cruz公司);磷酸化的ERK1/2抗体及磷酸化的P38抗体(美国Santa Cruz公司)。

1.3 小梁细胞的培养和鉴定 采用组织块培养法培养猪眼小梁细胞，免疫组织化学染色(SP法)对传第3代的小梁细胞分别进行FN、LN染色鉴定［4］。

1.4 细胞分组 待爬片的小梁细胞接近融合时，将细胞爬片血清饥饿培养24 h后的细胞分成2组:对照组和IL-1α组。对照组加入无血清培养基，IL-1α组加入10 mg·L-1IL-1α，放入含体积分数5%CO2培养箱中37℃培养30 min。

1.5 SP法测定 猪眼小梁细胞ELAM-1表达。每组随机选取5个视野，计算每个视野阳性细胞均数。

1.6 Western blotting测定 应用 Western blotting技术，以β-actin作为内参照，比较IL-1α对猪眼小梁细胞磷酸化的ERK1/2、JNK和P38蛋白表达的影响。……