胃癌患者血清P53、PCNA抗体的检测及意义
2011-05-16刘辉琦王生兰青海大学医学院病理生理教研室青海省西宁市8000西宁市第一人民医院消化内科
刘辉琦 刘 慧 刘 杰 王生兰 青海大学医学院病理生理教研室,青海省西宁市 8000; 西宁市第一人民医院消化内科
胃癌居消化系肿瘤之首,其发病率和死亡率近年不断上升,每年新发病例及死亡率分别占全部恶性肿瘤的17%和20%[1~3],严重威胁着人民健康。许多患者在就诊时已经到了中晚期,丧失了最佳治疗时机。因此胃癌的早诊、早治是降低其死亡率,提高生存率的主要手段。P53基因的突变、蛋白的表达及抗体的产生是多种肿瘤包括胃癌发生中的事件,血清中P53抗体的检测在某种程度上可作为肿瘤的辅助诊断及预后的判定。细胞增殖核抗原(PCNA)在胃癌中表达增加[4],但血清中是否有PCNA抗体及能否用于胃癌血清学检测尚需进行验证。本研究旨在通过检测胃癌患者血清中P53、PCNA抗体,判断其在胃癌血清学诊断中的意义。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 标本。经病理诊断为原发胃癌的患者50例,其中男38例,女12例,年龄36~74岁。健康人50例,男32例,女18例,年龄28~56岁。以上病例均在检查时或手术前、放化疗前肘静脉取血约3ml,非抗凝,待血液充分凝固后2h内2 000r/min离心,收集血清,于-80℃冰箱中贮存备用。
1.1.2 试剂。人P53抗体检测ELISA试剂盒购自美国R&D公司,人PCNA抗体检测ELISA试剂盒购自北京奇松生物科技有限公司。采用 Modern 450BIU-RAD酶标仪进行比色分析。
1.2 实验方法
1.2.1 血清PCNA抗体的测定。待测血清用标本稀释液1∶5稀释后每孔内加入50μl(每个样本做复孔)。标准品每孔内加入50μl(每个稀释浓度做复孔)。37℃温育120min。弃去液体,甩干。每孔加检测溶液 A 100μl,37℃反应60min。弃去孔内液体,洗板3次,甩干。……
