唐怀民,黄根池

我国肺癌的发病率呈上升趋势,现今每 4例恶性肿瘤死亡者中就有 1例是肺癌。早期诊断、及时治疗可以提高肺癌患者的生存率。除影像学和病理学检查外,现今已有多种肿瘤标志物用于肺癌检测的研究,但因特异性和敏感性不高,目前尚无临床应用的可靠标志物。近年来的研究表明, “分子警察”p53的野生型可以抑制血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,并通过旁观效应抑制肿瘤的生长和转移,而突变型 p53则可以上调 VEGF的表达,促进血管生成并促进肿瘤的生长和转移[1-2]。本研究通过检测非小细胞肺癌 (none small cell lung cancer,NSCLC)患者血清 VEGF和p53抗体的水平并与健康对照组进行比较,探讨在肺癌生长及转移中生长因子的调控作用及其对肺癌的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 对照组:健康志愿者 45例,其中男 25例,女 20例,年龄 24～74岁,平均 50.8岁。肺癌组:2004年 6月—2007年 3月在本院住院治疗的初诊为 NSCLC患者 69例,近期无急性感染病史,均经肺活检组织病理或细胞学检查检查确诊;其中男 45例,女 24例,年龄 32～78岁,平均 55.3岁;腺癌 32例,鳞癌 28例,腺鳞癌 5例,肺泡细胞癌 4例;依据 1997年肺癌国际分期标准,Ⅲa期 13例,Ⅲb期 27例,Ⅳ期 29例;采血时已接受 1周期以上铂类化疗方案 25例,未行化疗 44例。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 两组均晨起采集外周静脉血 2ml,1000转离心 4min留取血清,-20℃保存待测。

1.2.2 实验方法 血清 p53抗体和 VEGF检测采用酶联免疫吸附法 (ELISA),按照试剂盒 (均来自北京鼎国生物技术公司,编号分别为 BMS256MST和 900-K10)说明书进行操作,使用 Bio-Rad公司 Powerwave酶标仪检测。

1.3 统计学方法 应用 SPSS 10.0软件,计量资料以 (±s)表示,以 P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清 VEGF和 p53抗体检测结果 肺癌患者血清血清 VEFG和 p53抗体明显高于对照组健康人群,差异有统计学意义 (P＜0.001,见表1)。

2.2 血清 VEGF和 p53抗体在病理分型间的比较 结果表明,腺癌患者血清 VEGF和 p53抗体浓度明显高于其他病理分型(P＜0.001),其他依次是鳞癌、腺鳞癌和肺泡细胞癌,但后 3者在统计学上无明显差别 (两两比较,P值分别为 0.685,0.086和 0.234,见表2)。

2.3 血清 VEGF和 p53抗体在临床分期间的比较 血清VEFG和 p53抗体浓度在 3个临床分期之间均有明显差别 (P＜0.001),以Ⅳ期最高,其次是Ⅲb期和Ⅲa期 (见表3)。

2.4 肺癌患者血清 VEGF与 p53抗体的相关性 VEGF与 p53抗体浓度值呈正相关 (r=0.762,P＜0.001),总体相关系数可信区间为 (0.508,0.987)。血清 VEGF和 p53抗体浓度的95%医学参考值范围分别为 ＜78.7pg/ml和 ＜0.47U/ml。两项联合检测的敏感性明显高于单项检测。

表1 健康人群与肺癌患者血清 VEGF和p53抗体浓度比较 (±s)Table1 Comparison of VEGF,p53 between two groups

表1 健康人群与肺癌患者血清 VEGF和p53抗体浓度比较 (±s)Table1 Comparison of VEGF,p53 between two groups

组别 例数 VEGF(pg/m l)测定值 波动区间p53抗体 (U/ml)测定值 波动区间对照组 45 45.2±17.1 29.4～145.6 0.22±0.13 0.01～0.45肺癌组 69 121.7±43.2 45.6～704.3 5.74±3.22 0.38～18.39

表2 血清VEGF和p53抗体浓度在不同病理分型之间的比较 (±s)Tab le 2 Comparison of VEGF,p53 in different types of lung cancer

表2 血清VEGF和p53抗体浓度在不同病理分型之间的比较 (±s)Tab le 2 Comparison of VEGF,p53 in different types of lung cancer

组别 例数 VEGF(pg/ml)测定值 波动区间p53抗体 (U/ml)测定值 波动区间腺癌 32 185.9±53.6 105.0～704.3 9.74±4.02 3.68～18.39鳞癌 28 102.5±34.2 65.6～335.6 3.82±2.07 1.67～10.30腺鳞癌 5 138.5±43.7 82.6～405.1 5.94±3.48 2.38～12.39肺泡细胞癌 4 91.7±33.2 45.6～303.3 2.74±1.22 0.38～4.50

表3 血清 VEGF和 p53抗体浓度在不同临床分期之间的比较 (±s)Table3 Comparison of VEGF,p53 in in different types of clinicalstage

表3 血清 VEGF和 p53抗体浓度在不同临床分期之间的比较 (±s)Table3 Comparison of VEGF,p53 in in different types of clinicalstage

组别 VEGF(pg/m l)测定值 波动区间p53抗体(U/ml)测定值 波动区间Ⅲa期(13例) 92.5±30.4 45.6～332.4 2.44±1.13 0.38～5.52Ⅲb期(27例) 134.5±45.8 79.5～423.1 5.54±3.15 6.39～11.55Ⅳ期(29例) 195.9±63.5 135.0～704.3 10.07±4.65 4.88～18.39

表4 血清 VEGF和 p53检测肺癌的临床诊断价值分析Table4 The relationshipg between VEGF and p53

3 讨论

p53基因是最重要的抗癌基因,在多种人类恶性肿瘤中p53基因突变是最常发生的基因改变。其编码产物 p53蛋白分野生型和突变型两种。野生型 p53可调节细胞周期,使 DNA损伤的细胞停滞在 G1期,以利于 DNA修复,若修复失败则诱发细胞凋亡。p53基因突变后可表达过量的突变型 p53蛋白,刺激机体发生免疫应答反应,产生抗突变型 p53蛋白的自身抗体,因此检测血清突变型 p53抗体可间接反映 p53基因突变,对肺癌的辅助诊断有很大意义。VEGF被认为是作用最强,特异性最高的血管生成调控因子,在 NSCLC中异常表达显著高于良性和正常肺组织[3]。本研究发现 NSCLC患者血清 VEGF和 p53抗体浓度明显增高,其中腺癌患者最高,鳞癌、腺鳞癌和肺泡细胞癌等病理类型次之,两者均随临床分期的上升明显升高,说明 NSCLC的发生和发展与 VEGF和 p53基因的表达呈正相关。

有研究报道 p53基因对 VEGF的表达有调控作用[4]。Bouvet等[5]在对转染细胞模型进行 VEGF诱导血管形成研究时,发现突变型 p53可上调 VEGF的表达,从而促进肿瘤新生血管的形成。本研究也证明了 VEGF与 p53抗体浓度值呈正相关,提示 p53与 VEGF的表达有内在联系。另有研究表明突变型p53蛋白是通过减少凝血栓蛋白 21(thrombospontin,TSP21)或增强蛋白激酶 C的活性使 VEGF的表达量增加[6]。

国外有报道 p53抗体在肺癌患者中阳性率为 46.1%,其中肺腺癌 28.0%,肺鳞癌 55.6%,大细胞肺癌 100%[7]。另有研究显示 NSCLC患者血清 VEGF水平显著高于良性疾病及健康人,以 450ng/L为限,VEGF诊断的敏感性为62%,特异性为 95%[8]。本研究确定的 NSCLC患者血清 VEGF和 p53抗体浓度的阳性界限分别为 78.7pg/ml和 0.47U/m l,以此为限,两者单独检测的敏感性分别为 66.7%和 60.9%,而联合检测敏感性提高到 86.9%,与常见的肿瘤标志物 CEA相比能明显提高肺癌的检出率 (据报道晚期肺癌 CEA单独检测阳性率约20%)。另外本研究还观察了24例实施肺癌根治术的患者,术后 79.2%(19例)患者血清 VEGF和 p53抗体联合检测结果转为阴性。但由于观察时间短,未能对患者的生存率做追踪观察。

上述各项研究表明,突变型 p53调控 VEGF的表达,在NSCLC的发生发展中起重要作用。p53抗体可以作为临床上敏感性和特异性均较高的肿瘤血清学指标,与 VEGF联合检测能明显提高 NSCLC的检出率。而且,血清样本的 ELISA定量检测简单方便,稳定性好,费用低廉,并且无需取组织标本,有能广泛应用于临床的价值。

1 Fujiwara T,Nishizaki M,Tanaka N,et al.Recombinant adenovirus expressing wild-type p53 is antiangiogenic-implication for lung cancergene therapy[J].Gan To Kagaku Ryoho,2000,27(8):1217-1224.

2 Koukourakis MI,Giatromanolaki A,O′Byrne KJ,et al.Bcl22 and cerbB22 proteinsare involved in the regulation of VEGF and of thymidine phosphorylase angiogenic activity in none small cell lung cancer[J].Clin Exp Metastas,1999,17(7):545-554.

3 Fontaning G,Vignati S,Bigini D,et al.Epidermal growth factor receptor expression in non-small cell lung carcinomas correlateswithmetastatic involvement of hilarand mediastinal lymph nodes in the squamous subtype[J].Int JCancer,1996,67:615-617.

4 Linderholm BK,Lindahl T,Holmberg L,et al.Theexpression of vascular endothelial growth factorcor relates withmutant p53 and poor prognosis in human breast cancer[J].Cancer Res,2001,61(5):2256-2260.

5 Bouvet M,Ellis LM,Nishizaki M,et al.Adenovirus-mediated wild-type p53 gene t ra nsf er down-regulates vascular endothelial growth factor expression and inhibits angiogenesis in human colon cancer[J].Cancer Res,1998,58(6):2288-2292.

6 Gautam A,Densmore CL,Melton S,et al.Aerosol delivery of PEI-p53 complexes inhibits B16-F10 lungmetastases through regulation of angiogenesis[J].Cancer Gene Ther,2002,9(1):28-32.

7 Segawa Y,Kageyama M,Suzuki S,et al.Measurement and evaluation of serum anti-p53antibody levels in patients with lung cancer at its initial presentation:a prospective study[J].Br JCancer,1998,78(5):667-672.

8 Trape J,Buxo J,De Olaguer JP.Serum concentrations of vascular endothelial growth factor in advanced non-small cell lung cancer[J].Clin Chem,2003,49(3):523-524.