王晓兵，张薇，田国祥

应激(stress)是指内外环境刺激超过正常阈值时，机体出现的一种包括神经、内分泌和免疫系统等在内的综合应答状态。在应激状态下，各种有机体都有其共同的分子反应，即正常基因表达的抑制和一组特殊基因——热休克蛋白基因的激活和表达，这导致热休克蛋白(HSP)的大量产生。血清皮质酮(CORT)增多是机体应激时的一个重要表现，应激时糖皮质激素(glucocorticoids，GC)分泌显著增多具有重要的生理意义，不仅可以调控炎症反应，而且还有参与机体能量代谢、提高血管对儿茶酚胺的敏感性以及稳定溶酶体膜等多种作用。本实验通过采用皮质酮对大鼠主动脉内皮细胞的干预，目的在于观察皮质酮对大鼠主动脉内皮细胞热休克蛋白90表达的影响。

1 材料与方法

1.1 主要材料和试剂 健康Wistar大鼠(清洁级)，体重(120±10)g，购自第三军医大学动物所;皮质酮购自Sigma公司;抗HSP90抗体购自Santa Cruz公司。Elx800型酶标仪为BIO2TEK公司产品;倒置光学显微镜(BX60)为德国Leica公司产品;PCR仪为Eppendorf公司产品。

1.2 模型制做及实验分组 采用大鼠主动脉“环”植块培养［1］大鼠主动脉内皮细胞及传代，实验用大鼠主动脉内皮细胞随机分为三组，分别为正常组、量效组和时相组，量效组加入终浓度分别为0.1μM、50μM和100μM的CORT，分别继续培养2 h、4 h、6 h、12 h、24 h和72 h后收集细胞并做进一步实验。

1.3 Bradford法测定细胞总蛋白含量［2］以牛血清白蛋白(BSA)为测量标准蛋白质，并将其配置成0.5 mg/ml溶液。取5支EP管分别加入0.5 mg/ml BSA 5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，再加0.15 mmol/L NaCl补足至 100μl;另取一支 EP管加入 100μl 0.15 mmo1/L NaCl作为空白对照。然后，每支EP管中各加入1 ml考马斯亮蓝G-250染液，充分混匀，室温下放置2 min，用1 cm光径的比色杯测595 nm波长处的吸光度(A595)，以A595与对应的标准BSA浓度作标准曲线。……