黄 巍，范 蓉，李希圣，郭文文，罗 彬，宋 慧，肖绍文，谢小薰*

(1广西中医学院第一附属医院，南宁530023;2广西医科大学组织学与胚胎学教研室)

顶体素结合蛋白(ACRBP)是一种能在睾丸生精细胞和多种肿瘤组织中表达，而在其他正常组织中几乎不表达的肿瘤—睾丸抗原(CTA)［1］。DNA甲基化是表遗传学的主要修饰形式，在基因表达调控、发育调节和基因组印迹等方面发挥重要作用。目前发现部分CTA如MAGE、NY-ESO-1、TAG的表达与基因启动子区域CpG岛的去甲基化有关［2～4］。以往，我们已从mRNA水平对ACRBP进行了前期研究，发现其限制性表达于正常组织、选择性高表达于肿瘤组织，并在大鼠睾丸中检测到ACRBP。2010年1～12月，我们研究了ACRBP在人睾丸组织中的定位，预测ACRBP启动子CpG位点序列，探讨其CpG位点在人正常睾丸组织中的甲基化状态及意义。

1 材料与方法

1．1 材料 UNIQ-10柱式基因组DNA抽提试剂盒，rTaq酶、pMD18-T载体，EZ DNA甲基化试剂盒。ACRBP多克隆抗体［5］、人正常睾丸冰冻组织及石蜡组织各1例(由广西医科大学组胚教研室提供)，3例正常睾丸组织切片来源于FDA805正常组织芯片，SupervisonTMHRP试剂盒，ACRBP Bisulfite PCR引物。

1．2 实验方法

1．2．1 ACRBP在人睾丸组织中表达检测 采用免疫组化法。常规石蜡切片处理，切片经高压修复后，用抗ACRBP多克隆抗体孵育，用SupervisonTMHRP试剂盒显色，步骤按试剂盒说明书操作。

1．2．2 ACRBP启动子CpG位点分析 通过NCBI、BDGP(NeuralNetworkPromoterPrediction)和METHPRIMER分析软件，对ACRBP基因进行启动子CpG位点分析，并设计用于Bisulfite PCR的特异性引物。

1．2．3 目的基因CpG位点的甲基化状态检测 采用Bisulfite PCR法。用UNIQ-10柱式基因组DNA抽提试剂盒提取人正常睾丸组织DNA，紫外分光光度仪确定DNA含量及纯度。……