赵家锋,王建南,吴青松,黄从云,高双全,张小龙,朱剑华,黄亚丽

(广东省粤北人民医院,1.肝胆外科;2.病理科;3.血液内科,广东韶关,512026)

胆囊结石是临床上一种常见病,在我国约80%的胆囊结石为胆固醇结石[1]。胆囊结石长期存在可继发胆囊炎、胆管炎、胰腺炎以及胆道肿瘤等,严重影响人们的健康和生活。目前胆囊结石的形成机制尚未完全明了。胆汁胆固醇过饱和理论认为,病人胆汁中胆固醇过多和胆汁酸减少,造成了胆固醇在胆汁中形成过饱和,进而结晶形成结石[2]。有研究表明,胆囊结石患者胆囊上皮细胞选择性吸收胆汁胆固醇和磷脂的能力降低[3]。这使得胆汁中的脂类物质易于沉积,最终导致结石的形成。本研究欲通过对人胆囊中MRP3、MRP4基因的检测,了解其在人胆囊胆固醇结石形成中可能的作用,分析胆囊胆固醇结石形成机制,进而为胆囊结石的形成机制的研究提供证据,并为临床防治提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 主要试剂:一步法RT-PCR试剂盒,购于宝生物工程(大连)有限公司;T RIZOL总RNA提取试剂盒,购于美国Invitrogen公司;100 bp DNA maker和DEPC,购于华美生物技术工程公司;Tris-base购自美国Promega公司;MRP3、MRP4及B-actin的PCR引物由上海生物工程公司合成。

1.1.2 0.1%DEPC水的配制:在室温下(约20℃)将DEPC(焦碳酸二乙酯)2 mL溶于1 998 mL三蒸水中,经磁力搅拌器搅拌30 min使其充分溶解。

2 实验方法

2.1 标本选择

2.1.1 实验组的选择:实验组所选用的30例患胆固醇结石人胆囊组织标本,为2009年4月～2010年9月因“胆囊结石”在本院行“LC(腹腔镜胆囊切除术)”后的手术标本,所入选的病例均经实验证实为胆囊结石为胆固醇结石(方法见后述),入选者无血脂异常,无病毒性肝炎病史等其他合并症;不伴有肝内胆管及胆总管结石。……