(胜利油田中心医院,山东东营 257034)

近年来随着广谱抗生素的使用,鲍曼不动杆菌对临床常用抗生素的耐药性逐年增加[1]。2005年 1月～2010年 6月,本研究对 309株鲍曼不动杆菌耐药表型和常见 β-内酰胺酶基因类型进行检测。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 309例鲍曼不动杆菌菌株分离自胜利油田中心医院 ICU病房确诊鲍曼不动杆菌感染的患者痰、创面分泌物、血、尿、胆管引流液、大便、脑脊液、胸水、腹水。使用 VITEK60细菌自动鉴定仪及NFC鉴定卡鉴定菌种,标准菌株为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌 ATCC27853。抗菌纸片亚胺培南(IPM)、哌拉西林(PIP)、哌拉西林 /他唑巴坦(TZP)、氨苄西林/舒巴坦 (ASM)、头孢他啶(CAZ)、头孢吡肟(FEP)、头孢哌酮 /舒巴坦(SCF)、阿米卡星(AK)、复方新诺明(SXT)、左旋氧氟沙星(LEV)、氨曲南(ATM)、头孢噻肟(CTX)、头孢曲松(CRO)。M-H培养基。

1.2 鲍曼不动杆菌菌株耐药表型检测 采用 K-B纸片扩散法。实验方法和判读标准均按照美国 NCCLS规定(M 100-S21-2011版)进行。

1.3 鲍曼不动杆菌菌株 β-内酰胺酶类型检测 采用改良三维试验大平皿法。以 Nitrocefin纸片鉴定出现红色为阳性结果,1 h后无颜色变化为阴性。以超声破碎法制备 β-内酰胺酶粗提物,头孢硝噻吩显色法检测提取物。按照文献[2]的方法操作,加入待测样本,放置平皿于 35℃温箱过夜培养 18～24 h,平皿上抑菌圈出现变形为阳性,反之为阴性。

1.4 鲍曼不动杆菌菌株 β-内酰胺酶基因类型的检测 分别采用 Qiagen Plasmid Minikit及手工碱裂解法提取质粒。①单一引物 PCR扩增法检测 OXA型β-内酰胺酶基因 OXA-23、OXA-24,方法参考文献[3]。②多重引物 PCR扩增法检测 ESBLs和AmpC酶基因,ESBLs的 3对引物及 AmpC的 6对引物设计及 PCR反应步骤参考文献[4]。……