李德华,单 伟

(辽宁医学院解剖学教研室,辽宁锦州 120001)

周围神经损伤后的再生与修复一直是一大难题。长段周围神经缺损需神经移植术来修复,但自体神经来源受限,异体神经移植后存在免疫排斥反应。近年来,组织工程化神经已成为研究的热点。较为理想的组织工程化神经是由干细胞与生物材料构建而成。人脐带间充质干细胞(HUMSC)具有多向分化的潜能,可表达与其他来源的间充质干细胞(MSC)大致相同的基因[1,2]。另外,HUMSC表达HLA-1,不表达HLA-DR、共刺激分子CD80(B7-1)、CD86(B7-2)和CD40,且表面尚未形成ABO和HLA抗原,缺少 T细胞活化所必需的第二信号系统[3,4],不会引起移植物抗宿主反应。因此,可认为HUMSC是一种较为理想的种子细胞。2010年 8～10月,我们观察了人脐带间充质干细胞(HUMSC)移植对大鼠坐骨神经损伤的修复效果。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物、羊膜、细胞及主要试剂 成年健康SD大鼠 80只,体质量 180～230 g,雌雄不限。人羊膜(取自健康、足月、顺产的新鲜胎儿胎盘)。纯化HUMSC。DF12培养基(Invitrogen),胰蛋白酶。

1.2 实验方法

1.2.1 人羊膜的处理、制备 无菌条件下钝性分离胎膜内面的羊膜,氨水消化法处理后平铺于黑色塑料托盘上,切割成2.0 cm×2.5 cm小块,置500 m l无菌PBS中,-20℃冷藏,使用前室温融化。

1.2.2 HUMSC培养 纯化的HUMSC培养后, PBS清洗,0.25%胰蛋白酶消化,1 000 r/m in离心5 min,去上清,加新的培养液,计数细胞,分装培养,传至第 3～4代,用培养基配制 1×106/m l细胞悬液,供羊膜腔注入。

1.2.3 动物模型的制备及观察 80只SD大鼠以10%水合氯醛腹膜腔注射麻醉后,于其股后部做斜行25mm切口,沿股二头肌与股外侧肌之间的间隙钝性分离,寻找、暴露、游离坐骨神经。……