邱晓菲,张师前,马晓晋

(1滕州市中心人民医院,山东滕州 277500;2山东大学齐鲁医院)

在宫颈癌发生发展过程中存在多个基因的表达异常,实现基因功能表达的最终物质是蛋白质。因此,直接测定蛋白质的水平和活性是了解细胞活动的最好办法。“差异”蛋白质组学是肿瘤标志物筛选的一个突破口[1]。近年来,以激光捕获显微切割(LCM)技术、双向凝胶电泳、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)为基础的蛋白质组学技术已广泛应用于肿瘤的研究。LCM与现代质谱相结合已成为肿瘤标志物筛选的理想技术[2]。2010年9月,我们采用LCM和MALDI-TOF-MS对高同质性宫颈鳞癌组织细胞及正常宫颈细胞进行蛋白质组学的比较研究,以期获取宫颈鳞癌的分子标志物。

1 材料与方法

1.1 宫颈鳞癌组织及正常宫颈组织的获取 人宫颈鳞癌组织及癌旁正常宫颈组织取自山东省立医院和滕州市中心人民医院的宫颈癌手术切除标本,其中宫颈鳞癌 5例份、癌旁正常宫颈组织 4例份。宫颈癌患者未接受放疗或化疗。获取组织 4℃冰盐水冲洗3～5次,均匀分割成0.2 cm×0.2 cm×0.2 cm组织块,分装于 0.5 m l离心管中,先置液氮中速冻,置-80℃冰箱保存备用。

1.2 方法

1.2.1 组织切片的制备及染色 取备检组织,OTC包埋,-25℃切片,厚 8μm。每例标本第1张切片行HE染色,以后每张切片85%、95%(体积分数)乙醇脱水各30 s,无水乙醇2min固定2次。将制备好的组织切片置显微镜载物台,直视下观察选定要切割的区域,按最大捕获效率设定参数。

1.2.2 细胞捕获 采用LCM技术。将切片置于PALM显微激光切割系统 10×10倍目镜直视观察,选定要切割的区域。……