周 怡,王 琪,张 玮,李 力,＊

(1广西医科大学医学科学实验中心,南宁 530021;2广西医科大学附属肿瘤医院)

激光捕获纤维切割(LCM)技术可以根据形态学标准直观、准确和高效地从复合组织中特异性挑选出某一特定类型的细胞[1]。免疫磁珠(IMB)技术能使与磁珠上抗体特异性结合的抗原从其他物质中分离出来,在免疫检测、细胞分离、蛋白质纯化等方面均显示出良好的应用前景[2]。本研究采用 LCM联合IMB技术钓取恶性卵巢上皮瘤细胞中的特异性标志物黑色素瘤激活因子CXCL1及IL-8(1～77 aa)、IL-8(6～77 aa)和IL-8(9～77 aa),并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)技术进行了检测。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源 正常、良性及恶性卵巢上皮瘤组织为 2006～2008年广西医科大学附属肿瘤医院留取的手术标本,经术后病理检查证实。恶性卵巢上皮瘤按照FIGO标准诊断为卵巢上皮癌,组织分级为 G2级,临床分期为Ⅲ～Ⅳ期。

1.1.2 主要仪器及试剂 快速冰冻切片机,激光捕获微切割显微镜,基质辅助激光解吸时间飞行质谱。IMB试剂盒,微量层析柱,CXCL1、IL-8抗体。TBO染液,动物细胞裂解液等。

1.2 方法

1.2.1 细胞捕获及其蛋白的提取 正常、良性及恶性卵巢上皮瘤组织冰冻切片的制备、染色及脱水过程如文献[3]所述。采用 LCM技术,每张切片平均捕获8 000 shottings。收集捕获细胞,-80℃保存。用动物细胞裂解液试剂盒提取捕获细胞的总蛋白,按说明书操作。

1.2.2 CXCL1及不同亚型IL-8分离 采用IMB技术。操作按说明书进行。

1.2.3 CXCL1及不同亚型IL-8蛋白样本的浓缩和脱盐 采用含C18填料的微量层析柱对CXCL1及不同亚型IL-8蛋白样本进行浓缩和脱盐。……