傅明亮，刘晓杰，刘 婧，何国庆，陈启和*

(浙江大学生物系统工程与食品科学学院，浙江 杭州 310029)

地衣芽孢杆菌弹性蛋白酶纯化和性质研究

傅明亮，刘晓杰，刘 婧，何国庆，陈启和*

(浙江大学生物系统工程与食品科学学院，浙江 杭州 310029)

用地衣芽孢杆菌发酵液制备弹性蛋白酶粗酶液，采用硫酸铵分级沉淀和Sephadex凝胶柱层析的方法分离纯化弹性蛋白酶，并对弹性蛋白酶的酶学性质进行研究。结果表明：弹性蛋白酶粗酶液经40%～70%饱和度的硫酸铵纯化后比活力提高到120U/mg，经凝胶柱层析纯化后比活力可达到292U/mg，纯化倍数为12.6，SDS-PAGE法证实弹性蛋白酶分子质量为29.5kD。对酶学性质的研究结果表明：弹性蛋白酶最适反应温度为55℃，最适反应pH值为7.4，以刚果红-弹性蛋白为底物，米氏常数Km为9.67mg/mL。低浓度金属离子Ca2+和K+对酶活力有促进作用，而Mg2+、Mn2+、Zn2+和Al3+对酶活力则有抑制作用。

地衣芽孢杆菌ZJUEL31410；弹性蛋白酶；纯化；酶学性质

弹性蛋白酶(EC 3.4.4.7，elastase)，是一种以水解不溶性弹性蛋白为特征的蛋白水解酶，可作为治疗高血脂症、防止动脉粥样硬化的生化药物[1]。兰辛[2]研究发现，弹性蛋白酶能有效抑制用高脂高营养饲料喂养小鼠的血清和胆固醇的升高，降低体内甘油三酯(TG)和丙二醛含量(MDA)。此外，由于弹性蛋白酶能够专一降解结缔组织中坚韧的弹性纤维组分，当其他蛋白与弹性蛋白共存时，此酶优先对弹性蛋白水解，因此弹性蛋白酶可以作为理想的肉类嫩化剂用于食品加工业[3]。

弹性蛋白酶可由动物胰脏提取或由微生物发酵制得，我国弹性蛋白酶的生产主要从猪胰脏提取，但由于脏器资源利用受限制，弹性蛋白酶向来供不应求，因此研究者都转向微生物发酵法制备弹性蛋白酶[4]。……