黄 波,郎贤平,王晓东

(辽宁医学院附属第一医院,辽宁锦州 121000)

小细胞肺癌手术治疗效果差,虽然对化疗药物敏感,但很快会产生耐药。川芎嗪是川芎的有效成分之一。顺铂是常用化疗药物,对小细胞肺癌有一定疗效,但后期易出现耐药。有研究表明,化疗药物与川芎嗪联合应用,可提高某些恶性肿瘤的治疗效果[1]。我们的前期研究证实,川芎嗪联合顺铂可抑制小细胞肺癌细胞株增殖[2]。为进一步研究其机制,2009年 6月 ～2010年 9月,我们观察了川芎嗪、顺铂联合应用对人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响,并探讨其机制。

1 材料与方法

1.1 细胞株及主要试剂 人小细胞肺癌细胞株NCI-H446。盐酸川芎嗪注射液,顺铂注射液。小牛血清和RPMI1640培养基,p53和Bcl-2一抗。

1.2 方法

1.2.1 细胞分组与培养 NCI-H446细胞株在含10%小牛血清的RPMI1640培养液中培养。将细胞用胰酶消化,制成单细胞悬液(1×105/m l),然后分为A、B、C、D组,分别接种于6孔板,每组3个平行孔,每孔接种细胞悬液2 ml。A组常规培养,B组加入川芎嗪培养液100μg/ml,C组加入顺铂培养液2 μg/ml,D组加入上述浓度的川芎嗪及顺铂培养液,均继续培养72 h。

1.2.2 凋亡细胞检测 吸去各组上清液,常规消化细胞;1 500 r/min离心5min,弃上清;PBS重悬细胞后,移至EP管中,1 500 r/min离心5 min。加5 μl的AnnexinⅤ-FITC溶液和2.5μl的PI至100μl细胞混悬液中,混合后室温避光反应30 min,加入反应缓冲液 400μl,上流式细胞仪检测。

1.2.3 各组细胞p53、Bcl-2蛋白检测 采用Western blot法,按试剂盒说明书操作。以NC膜上出现清晰的棕褐色条带为阳性,用凝胶成像系统对显色条带扫描的灰度值与 β-actin灰度值的比值表示p53、Bcl-2蛋白表达量。

1.2.4 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。……