赵良渊，张秋华

(1.山西医科大学药学院，山西太原 030001;2.山西大学环境与资源学院 030006)

绿茶常被称为是天然的抗氧化剂，含有很多种酚类物质，其中以表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)含量最高且生物活性最强。流行病学调查和实验室研究表明，EGCG具有清除自由基、抗氧化、抗癌、抗肿瘤等功效［1-2］，如在日本等饮茶较多的国家或地区，冠心病等心血管疾病的发病率是非常低的［3］。近年来，关于EGCG 的抗氧化机制被广泛接受的是具有较强的抗氧化能力［4］。关于EGCG对心血管系统的保护机制报道不多，本实验主要研究了EGCG对亚硫酸盐诱导心肌细胞氧化损伤的抑制作用。

1 材料与方法

1.1动物实验动物Wistar大鼠，200～300 g，♀♂不限，由山西省中医药研究院动物房提供。

1.2大鼠心肌细胞的分离Wistar大鼠，体质量200～300 g，♀♂不限，具体分离方法见参照Wei等［5］。所有实验应在细胞分离后的12 h内完成。

1.3试剂亚硫酸钠(Na2SO3)，亚硫酸氢钠(NaHSO3)，牛磺酸(Tau)，L-谷氨酸(L-Glu)，牛血清蛋白(BSA)，HEPES，MgATP，CsCl，EGTA，EGCG 购 自 Sigma 公 司 (纯 度 ＞99.8%)，胶原酶P(Collagenase P)购自Roche公司，其它试剂均为国产分析纯。配制2 mol·L-1的NaHSO3和Na2SO3混合液(二者摩尔比为1∶3)、2 g·L-1EGCG的母液，实验前稀释到需要浓度。

1.4SOD、CAT、GPx活性的测定消化结束后，取分离完成的细胞悬液2 ml，先用10 μmol·L-1的亚硫酸盐染毒30 min，后分别加入 10、30、50 mg·L-1EGCG 处理 40 min。染毒结束后用超声波细胞破碎仪破碎细胞，于4℃ 4 000 r·min-1离心15 min。取上清液，测定总SOD，CAT，GPx的活性(按试剂盒说明书操作)。实验同时设对照和亚硫酸盐单独染毒各一组。

1.5·含量的测定同样取细胞破碎上清液，按照南京建成试剂盒测定H2O2，OH·及含量。

1.6 数据分析所有试验结果用±s表示，用one-way ANOVA检验进行统计分析。……