金 燕 刘光耀 (吉林大学第二医院眼科，吉林 长春 3004)

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病的严重眼部并发症，血-视网膜屏障(blood-retina barrier，BRB)破坏是DR的主要病理改变之一，是引起糖尿病黄斑水肿(diabetic macular edema，DME)的主要原因〔1〕。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是引起视网膜血管渗漏的最主要因子，目前抗VEGF药物正成为DME治疗领域新的研究热点〔2～4〕。本研究在建立糖尿病大鼠模型的基础上，观察抗VEGF单克隆抗体Bevacizumab玻璃体腔注射对早期糖尿病大鼠BRB功能的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康雄性Wistar大鼠40只，体重约250 g，随机分为糖尿病模型组(30只)及正常对照组(10只)。

1.2 方法

1.2.1 糖尿病大鼠模型的建立 链脲佐菌素(STZ，Sigma公司)以0.1 mol/L，pH4.2的柠檬酸缓冲液配制成1%的溶液，大鼠禁食12 h后按60 mg/kg腹腔注射STZ，注药后第3天及第7天测尾静脉血糖，血糖≥16.7 mmol/L确认糖尿病模型建立，以后每周测一次血糖、尿糖。正常对照组腹腔注射0.1 mol/L的柠檬酸缓冲液。建模2 w的糖尿病大鼠用于实验，分为糖尿病组(10只)，药物对照组(10只)，药物干预组(10只)。药物干预组玻璃体腔内注入25 mg/ml的Bevacizumab 3 μl，药物对照组玻璃体腔内注入平衡盐溶液(BSS)3 μl，注药后1 w，采用溴化乙啶(EB)法测定BRB破坏程度。

1.2.2 BRB功能的测定 腹腔注射氯胺酮(90 mg/kg)麻醉大鼠，45 mg/kg EB(Sigma公司)尾静脉注入，2 h后以1%多聚甲醛柠檬酸缓冲液(0.05 mol/L，pH3.5)经心灌注2 min，灌注压力120 mmHg。灌注结束后，立即取出眼球，分离视网膜，快速真空干燥5 h后称干重，加入200 μl甲酰胺(Sigma公司)称其湿重。在70℃下孵育18 h。然后将提取液在4℃，16 000 r/min下高速离心30 min。取上清液100 μl用分光光度计(Beckman，DU-640)测其吸光度(A)值，所用波长为620 nm和740 nm两种，净吸光度值(nA)=A620nm－A740nm。每一样品测量3次，取均值。……