郑晓强 陈君敏 (福建医科大学附属第一医院血液科，福建 福州 350000)

目前研究表明，骨髓瘤骨病(MBD)患者的OB存在发育障碍〔1〕，具体机制尚不明确。Runx2是调控OB发育的关键因子〔2〕，其是否参与MM骨形成障碍的机制，国内尚未见有报道。本文建立骨髓瘤细胞株和MSCs共培养体系，研究骨髓瘤细胞对MSCs生物特性和Runx2表达的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 MM细胞系U266细胞株由福建医科大学附属协和医院血液病研究所馈赠，L-DMEM培养基干粉、PBS粉剂、0.25%胰蛋白酶(Gibco公司)，人淋巴细胞分离液(上海试剂二厂，比重1.077±0.001)，新生胎牛血清、青链霉素(Hyclone公司)，地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素 C(美国 Sigma公司)，BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒(碧云天生物技术研究所)，引物合成(上海生工)，Trizol液(Tri Reagent公司)，cDNA第一链合成试剂盒(Fermentas公司)，聚合酶链反应试剂、标记物、焦碳酸二乙酯、PCR Master Mix、琼脂糖(厦门泰京生物工程有限公司)，异丙醇、氯仿，无水乙醇、多聚甲醛、中性红、硝酸银、硫代硫酸钠(上海试剂总厂)。

1.2 方法

1.2.1 骨髓MSCs的培养 骨髓标本来源于2例缺铁性贫血患者和1例特发性血小板减少性紫癜患者，平均年龄(58.8±5.63)岁。抽取骨髓液5 ml，加入肝素管中，颠倒混匀防止凝固。加入等体积PBS，混匀，1 000 r/min离心5 min，去除脂肪及上清。加入等体积PBS，吹打混匀。将细胞悬液加至盛有等体积淋巴细胞分离液的离心管中，2 500 r/min离心30 min。收集中间层面云雾状单个核细胞层，L-DMEM培养液(为含10%新生胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 U/L链霉素的低糖DMEM)洗涤细胞，1 000 r/min离心5 min。调整细胞密度为106/ml，接种于25 cm2培养瓶，放入37℃，5%CO2培养箱。培养5 d后首次换液，以后每3天换液，每日倒置相差显微镜下观察细胞生长情况。……