李东至

（广州市妇女儿童医疗中心 产前诊断中心，广东 广州 510623）

目前，DNA碱基变异如突变或单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）的检测方法有2种：一是针对特定的位点合成序列特异性探针，如Taqman探针法、位点特异寡核苷酸分析、反向斑点杂交及基因芯片等，用于检测已知突变；二是以核酸的物理性质为基础的检测方法，如变性-高效液相层析、单链构象多态性、变性梯度凝胶电泳、温度梯度凝胶电泳及构象敏感凝胶电泳等，此类方法可用作突变筛查，但无法明确突变性质。这2种方法在应用上有其局限性，如成本高、操作繁琐、耗时、以及相对低通量。DNA测序是突变／SNP检测的金标准，但不适于大规模突变筛查和流行病学研究。2002年犹他大学和爱德华科技公司合作开发出突变／SNP检测分析的一项新技术—高分辨率熔解曲线分析（high resolution melting，HRM）［1］。这种技术不受突变碱基位点与类型的限制，可同时对扩增片段进行未知突变扫描和已知突变的基因分型。因其操作简便、快速、高通量、低成本和真正实现了闭管操作而受到普遍的关注，成为近年来兴起的一种高通量突变扫描和基因分型技术。

1 HRM原理

通过PCR反应扩增出目的基因的双链DNA片段，向反应产物中加入荧光染料，这种染料只结合双链DNA而不结合单链DNA。然后通过加热物理变性，在升温的过程中DNA双链会逐渐打开，这样结合的荧光染料会越来越少。如果相机连续动态拍摄解链过程，并将接收到的逐渐减弱的荧光信号通过计算机软件转换成一条曲线，这条曲线就是熔解曲线。……