谢燕，陈海琴，张秋香，田丰伟，陈永泉，张灏，陈卫

江南大学食品学院，无锡 214122

一种新型IIa类细菌素的克隆表达和活性鉴定

谢燕，陈海琴，张秋香，田丰伟，陈永泉，张灏，陈卫

江南大学食品学院，无锡 214122

NB-C1为一种潜在的IIa类细菌素基因，为实现其在大肠杆菌中的高效可溶表达，首先构建了NB-C1蛋白与绿色荧光蛋白 (GFP) 的融合表达载体 pIVEX 2.4d-GFP-NB-C1，然后将构建的表达载体转化大肠杆菌 BL21(DE3) pLysS，经诱导表达后，重组蛋白GFP-NB-C1以可溶的形式存在于细胞内。经Ni-NTA亲和层析柱分离纯化后，重组融合蛋白的纯度大于95%，产量达36.1 mg/L。抑菌试验表明，纯化后的重组蛋白对单核细胞增生李斯特氏菌具有明显的抑制作用。

IIa类细菌素，融合表达，蛋白质纯化，活性鉴定

采用传统的菌种筛选法寻找新的细菌素，存在乳酸菌出发菌株细菌素产量低，分离纯化困难等问题[3]。我国有丰富的乳酸菌资源，随着乳酸菌基因组序列报道的日趋增多，利用基因搜索工具寻找新的细菌素已成为一条快速有效的途径。根据细菌素氨基酸的保守序列及其结构基因上下游的特征编码基因，如调节基因、转运基因、免疫基因等的特征，利用生物信息学工具设计 IIa类细菌素基因的搜索比对脚本，在已测序乳酸菌基因组数据库中搜索潜在的IIa类细菌素基因，然后通过比对分析，排除错误基因和已报道的乳酸菌细菌素基因，从而确定新的细菌素基因。目前已从乳酸菌基因组中鉴定出多种细菌素基因[4-6]。Diep等[7]从一株戊糖片球菌中得到一条新的类片球菌素基因，在沙克乳杆菌中表达并获得较高的产量和活性。……